【摘 要】
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用RT-PCR技术扩增猪囊尾蚴T24免疫原基因,将扩增产物与pGEM-T Easy载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后进行测序;构建该基因的pPGEX-4T-1原核表达载体,用IPTG诱导表达,经SDS-PAGE电泳、Western-blotting分析,验证该基因是否表达及目的蛋白的反应原性;将所表达的蛋白免疫小鼠,经ELISA测抗,初步验证其免疫原性.结果表明,所克隆的基因片段长度为716
【机 构】
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中国农业科学院,兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃省动物寄生虫病重点实验室,甘肃,兰州,730046;石河子大学,动物科技学院,新疆,石河子,832003
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用RT-PCR技术扩增猪囊尾蚴T24免疫原基因,将扩增产物与pGEM-T Easy载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后进行测序;构建该基因的pPGEX-4T-1原核表达载体,用IPTG诱导表达,经SDS-PAGE电泳、Western-blotting分析,验证该基因是否表达及目的蛋白的反应原性;将所表达的蛋白免疫小鼠,经ELISA测抗,初步验证其免疫原性.结果表明,所克隆的基因片段长度为716 bp,含有1个开放性阅读框架678 bp,编码226个氨基酸,与已报道的猪囊虫T24基因核苷酸序列同源性为100％;表达的融合蛋白大小为40 ku,并能被猪囊虫阳性血清所识别;被免疫小鼠在一周后即检测到血清抗体,30d即达到较高水平(OD值为1.88),说明该融合蛋白具有较好的免疫原性.
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