【摘 要】
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通过长距离衔接头PCR(LA—PCR)方法克隆得到扩展青霉PF898脂肪酶基因5’端侧翼序列,经核酸数据库同源比对,发现该序列是一个新序列,提交GenBank数据库(GenBankaccession DQ67
【机 构】
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福建师范大学夏盛酶工程联合实验室,福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心 福州 350108
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通过长距离衔接头PCR(LA—PCR)方法克隆得到扩展青霉PF898脂肪酶基因5’端侧翼序列,经核酸数据库同源比对,发现该序列是一个新序列,提交GenBank数据库(GenBankaccession DQ677520).根据该核酸序列,并结合启动子软件对该序列可能存在的启动子片段的分析结果,经PCR扩增得到9条不同的亚克隆产物.将这些亚克隆片段分别定向连接到启动子探针型载体pSUPV4中,构建出以卡那霉素抗性基因为报告基因的重组载体,转化大肠杆菌,对该脂肪酶基因5’端侧翼序列的启动子功能进行分析,结果表明这些亚克隆片段均能在大肠杆菌中启动卡那霉素抗性基因的表达.其中卡那霉素抗性水平最高表现为3500 μg/mL,最低表现为1000 μ g/mL.
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