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研究背景:肝巨噬细胞在肝纤维化中发挥关键的调控作用。不同来源的巨噬细胞在肝纤维化进展期和消融期作用不同。骨髓来源巨噬细胞在进展期募集至肝脏,分泌促炎细胞因子并产生ROS,是进展期纤维化加重的主要因素;而在消融期,组织定居Kupffer细胞分泌抗炎细胞因子并产生MMPs降解细胞外基质,成为肝纤维化消融期的重要效应细胞。我们课题组前期研究提示,Notch信号影响巨噬细胞活化而参与肝纤维化调控。因此,不同来源的肝巨噬细胞如何参与肝纤维化的进展和消融过程,其调控的分子机制是什么,都是亟待回答的问题。研究目的:以Notch信号为切入点,以小鼠肝纤维化为疾病模型,从整体、细胞和分子水平回答组织定居Kupffer细胞在小鼠肝纤维化进展期和消融期的作用并阐明其调控的分子机制。方法:利用组织定居Kuppfer细胞中RBP-J基因剔除(Lyz-Cre/RBP-Jf/f/CCR2-/-)小鼠分别建立CCl4诱导的肝纤维化模型和BDL肝纤维化模型,通过组织学染色、血清学检测和纤维化相关分子及炎性因子表达检测对肝纤维化程度进行评价,并利用FACS对巨噬细胞亚群表型和功能状态进行细胞学分析。结果:组织学分析、血清学检测和促炎促纤维化因子检测结果显示,Kuppfer细胞剔除Notch信号对肝纤维化进展不产生影响,而在消融期加快纤维胶原降解,促进小鼠肝纤维化恢复。巨噬细胞亚群表型分析显示,纤维化进展期,在Kupffer细胞中阻断Notch信号,炎性Kupffer细胞数量有上升趋势,增殖能力增强。纤维化消融期,Kuppfer细胞剔除Notch信号,Kuppfer细胞数目比例升高,增殖增多。为初步解释Notch敲除后消融加快的原因,分选Kupffer细胞后检测发现,Notch敲除,Kuppfer细胞在mRNA水平MMP9表达升高,Timp1表达降低,提示Notch阻断后,Kuppfer细胞分泌促纤维降解分子能力增强,而分泌抑制纤维降解分子减少,进而促进肝纤维化的消融。结论:纤维化进展和消融期的疾病表型和细胞学表型结果初步提示,在肝纤维化进展期Notch信号或许不通过调控组织定居Kupffer细胞的活化而参与肝纤维化的调控,而在消融期发挥调控作用。其作用的分子机制有待进一步深入研究。