论文部分内容阅读
目的胆碱能抗炎通路(Cholinergic Antiinflammatory Pathway,CAP)通过激活表达于炎性细胞表面的α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7 nAChR),减少促炎因子的生成及释放,从而减轻机体的炎症反应。目前研究已发现,在缺血再灌注损伤、败血症、内毒素休克、炎症性肠病、自身免疫性心肌炎、胰腺炎等多种疾病动物模型中,通过电刺激迷走神经或药物激动α7 nAChR兴奋胆碱能抗炎通路,可以减轻这些疾病的炎症反应和病理损害,起到明显的治疗效果。然而胆碱能抗炎通路在病毒性心肌炎中的作用及具体机制目前尚不明确。本实验通过观察切断迷走神经及烟碱(α7 nAChR激动剂)处理对于病毒性心肌炎小鼠的影响,来进一步探讨胆碱能抗炎通路在病毒性心肌炎中的作用。方法:200只4周龄BALB/C小鼠随机分5组:正常对照组(n=40),假手术组(n=40),烟碱组(n=40),右侧颈部迷走神经切断组(n=40,简称切断组),右侧颈部迷走神经切断+烟碱组(n=40,简称切断+烟碱组)。假手术组麻醉后不切断右侧颈部迷走神经,而仅分离迷走神经。后4组经腹腔接种柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)建立急性病毒性心肌炎模型,正常组腹腔注射等量不含病毒的病毒培养液,接种当天记为第0天,24小时后烟碱组、切断+烟碱组每日腹腔注射1.2 mg/kg烟碱,余下3组每日腹腔注射等量磷酸盐缓冲液,直至第14天末。分别在病毒感染小鼠后第7天和14天,采用超声心动图仪评价各组小鼠心功能(左心室舒张末期与收缩末期直径、左心室射血分数及短轴缩短分数)的变化。分别于病毒接种第7和14天每组各随机抽取10只小鼠处死,无菌取心脏行病理切片,HE染色观察心肌组织炎症损伤程度。荧光定量PCR法测定CVB3 mRNA的表达。荧光定量PCR及ELISA法分别检测心肌组织TNF-α、IL-1β、IL-6及IFN-γ的mRNA水平和蛋白表达水平。结果:1.心脏超声参数:在第7天,假手术组、烟碱组、切断组及切断+烟碱组小鼠在LVEDd、LVESd、LVEF、LVFS上无统计学差异。在第14天,烟碱组的LVFS、LVEF明显高于假手术组(P<0.01),切断组的LVFS、LVEF明显低于假手术组(P<0.05),而比较LVEDd、LVESd无统计学差异。2.病理组织学:与假手术组比较,切断组的心肌病变程度明显加重(P<0.05),烟碱组的心肌病变程度明显减轻(P<0.05),切断+烟碱组的心肌病变程度介于切断组与烟碱组之间,与假手术组比较无统计学差异。3.病毒基因表达:在第7、14天,假手术组、烟碱组、切断组及切断+烟碱组四组心肌炎模型小鼠的CVB3 mRNA表达水平无统计学差异,第14天CVB3 mRNA水平较第7天有所下降。4.炎症因子的基因和蛋白表达水平:第7天,与假手术组比较,切断组心肌组织内炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6在mRNA水平和蛋白水平表达明显增加(P<0.05),烟碱组心肌组织炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6在mRNA水平和蛋白水平的表达明显减少(P<0.05),切断+烟碱组的IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平介于切断组和烟碱组之间,与假手术组相比有所降低(P>0.05)。在第7、14天,IFN-γ在假手术组、烟碱组、切断组及切断+烟碱组4组小鼠心肌中的表达无统计学差异。结论:在病毒性心肌炎小鼠模型中,迷走神经切断使心肌组织炎症损伤加重,心肌TNF-α、IL-1β、IL-6在基因和蛋白水平表达增加,左室缩短分数及射血分数下降,心功能恶化,而烟碱治疗使心肌病理损伤明显改善,心肌TNF-α、IL-1β、IL-6在基因和蛋白水平表达减少,左室缩短分数及射血分数增加,心功能改善。但二者都不影响IFN-γ的表达。激活胆碱能抗炎通路,可明显抑制心肌炎症反应,改善心功能,对病毒性心肌炎有保护作用。胆碱能抗炎通路可能成为急性病毒性心肌炎治疗的新靶点。