沉默Etheràgo-go1基因调控VEGF/PI3K/AKT抑制骨肉瘤增殖和血管生成的研究

来源 :中华医学会第十八届骨科学术会议暨第十一届COA国际学术大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xianglongke2000
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  目的 检测检测沉默Ether à go-go 1(Eag1)基因对骨肉瘤增殖和血管生成的影响及其可能的调控机制。方法 构建抑制Eag1表达的短发卡RNA(Short hair RNA,shRNA)重组腺病毒载体Ad5-Eag1-shRNA并感染骨肉瘤细胞株。采用实时定量聚合酶链反应(Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)和蛋白印迹技术(Western blot analysis,WB)检测Ad5-Eag1-shRNA的感染效能。采用CCK-8法和裸鼠成瘤实验检测感染前后骨肉瘤细胞增殖和裸鼠骨肉瘤体积的变化。采用免疫组化技术和WB技术分别检测感染前后裸鼠肿瘤组织中微血管密度(Microvessel density,MVD)和血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的变化。采用WB技术检测感染前后骨肉瘤细胞中VEGF、磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphoinositide 3-kinase,PI3K)和蛋白激酶B(Protein kinaseB,AKT)的表达变化。
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目的 探索短发卡RNA(shRNA)沉默Ether à go-go 1(Eag1)钾通道表达后对骨肉瘤细胞增殖的影响及可能的调控机制。方法 使用构建的Ad5-Eag1-shRNA表达载体感染骨肉瘤细胞株,采用逆转录定量聚合酶链反应(Reverse transcription polymerasechain reaction,RT-PCR)和蛋白质印迹法检测Ad5-Eag1-shRNA感染骨肉瘤MG
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