【目的】通过对不同方法制备的成年SD大鼠阴道涂片进行比较,探索制备阴道涂片的最佳方法,为临床前研究中准确判断大鼠的动情周期提供参考。【方法】雌性SD大鼠,28只,15-16周龄,连续4天分别使用不同方法制备阴道涂片。方法(1):将消毒棉签用生理盐水润湿后深插入大鼠阴道内(深度约1.2cm),在阴道内轻轻转动2圈,蘸取脱落细胞,取出将其尽量均匀的涂在载玻片上;方法(2):将消毒棉签用生理盐水润湿后浅插入动物阴道(深度约0.6cm),在阴道内轻轻转动2圈,蘸取脱落细胞,取出将其剂量均匀的涂在载玻片上;方法(3):用一次性滴管吸取约1ml生理盐水,打入大鼠阴道内,吹打2次,吸出约100μl液体滴于载玻片上,将其均匀涂开后吸去多余液体。方法(4):用移液器吸取生理盐水,打入大鼠阴道内,吹打2次,吸出10-20μl液体滴于载玻片上,将其均匀涂开后吸去多余液体;制备的阴道涂片自然晾干,用95%酒精喷雾固定,用姬母萨染液染色后在显微镜下观察,比较不同方法制备的阴道涂片的优劣。【结果】方法(1):各类细胞清晰可见,但部分视野细胞重叠,部分视野细胞稀少,细胞涂布不均匀,可勉强判断动情周期。另外,参考相关文献和工作经验,长期连续以此方法进行阴道涂片可能引起大鼠性激素异常分泌,导致动情周期紊乱。方法(2):大部分阴道涂片镜下基本同方法l,但部分涂片上细胞稀少,可能与棉签进入阴道太浅有关,且根据文献报告阴道口的上皮随动情周期的改变不明显,因此可能会影响动情周期的判断;方法(3):涂片成功率较低,滴管吹力和吸力不足,将生理盐水打入阴道后,滴管中经常有液体滞留,且回吸比较困难,制备的涂片部分细胞非常稀少,部分细胞密集重叠,影响对动情周期的准确判断;方法(4):各类细胞清晰可见,有核细胞和无核角化细胞区分明显,细胞分布很均匀,但打入生理盐水太多(200μl以上)则涂片细胞稀少,打入生理盐水太少(50μl以下)则涂片细胞太多,各种细胞密集重叠,均影响判断,打入80μl生理盐水后涂片细胞量适中,动情周期各阶段均清晰易辨。【结论】上述制备阴道涂片的方法中方法(4)最佳,即用移液器吸取80μl生理盐水,打入大鼠阴道内,吹打2次,吸出10-20μl液体滴于载玻片上,用枪头将其均匀涂开后吸去多余液体,然后将涂片自然晾干,用95%酒精喷雾固定,最后用姬母萨染液染色15-20分钟后镜检。制备阴道涂片中一定要注意无菌操作,阴道感染严重影响动情周期的判断。