【摘 要】
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通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增了PRRSV GP5,GP6基因并进行了克隆与鉴定。构建了含GP5基因的真核表达载体pcDNA-GP5,pcDNA-GP5/6,通过与鼠白血病病毒(MuLV)假病毒构建体系的两种质粒pHIT60和pHIT111瞬时共转染人胚肾细293T,48h后收集假病毒上清,将假病毒上清超速离心后用抗PRRSV的多抗通过Western-blot证明GP5蛋白能够在假
【机 构】
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河南农业大学,郑州,450002;南京农业大学,南京,210095 河南农业大学,郑州,45000
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会
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通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增了PRRSV GP5,GP6基因并进行了克隆与鉴定。构建了含GP5基因的真核表达载体pcDNA-GP5,pcDNA-GP5/6,通过与鼠白血病病毒(MuLV)假病毒构建体系的两种质粒pHIT60和pHIT111瞬时共转染人胚肾细293T,48h后收集假病毒上清,将假病毒上清超速离心后用抗PRRSV的多抗通过Western-blot证明GP5蛋白能够在假病毒颗粒表面表达,表明GP5能够整合到此病毒粒子表面,用其感染宿主细胞,48小时后X-GAL细胞染色发现有效基因lacz能有效表达,证实构建的PRRSV假病毒有感染性。本研究成功构建了MuLV-GP5假病毒体系,为研究PRRSV侵入细胞的机理及其组织嗜性的变异奠定基础,并且可能发展为一个没有生物危害在研究病毒入侵动物感染上的强有力的工具.
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猪瘟(classical swine fever,CSF)是影响我国养猪业最严重的传染病之一,每年造成的损失数以亿计。虽然猪瘟兔化弱毒苗的广泛应用及其它综合防制措施的实施,控制了CSF的大规模流行,但CSF仍在我国广大养猪地区不断发生和流行。从上世纪70年代初起,我国出现了所谓的非典型猪瘟和温和型猪瘟,免疫失败频频发生。发生免疫失败的因素很多,其中一个很重要原因是没有很好的免疫监测手段。我国长期以
猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种急性接触性传染病,是目前危害我国养猪业发展的主要疫病之一。省兽医卫生防疫站应用ELISA等技术对全省17个种猪场进行猪瘟抗体监测,共检测631份,其中母猪509份,公猪62份,后备母猪60份,猪瘟弱毒免疫抗体阳性588份,阳性率93.91％,猪瘟强毒免疫抗体40份,阳性率6.34％。及时发现患有猪瘟的病猪和隐性感染猪瘟的不显症状猪,对猪群进行治疗或淘汰净化猪群,成为控制和
在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)北美株感染性克隆pCBC2的基础上,利用突变PCR技术成功构建了在病毒基因组5端非编码区(5UTR)和ORF1起始密码子之间插入NdeⅠ的全长克隆pTLNd4,并在此基础上将北美株病毒的5UTR替换为欧洲株的5UTR,成功构建了全长克隆pTLV8。以体外转录的RNA转染MARC-145细胞,pTLNd4产生了细胞病变(CPE),pTLV8未产生.对这两株突变病
针对近年来吉林省一些规模化养殖场频繁发生以母猪流产、死胎、木乃伊、仔猪呼吸道症状等为特征的流行性传染病,2006年8月～2007年4月期间,对吉林某规模化养猪场连续跟踪,共计460头猪进行了调查,其中有哺乳仔猪、保育圈仔猪、育肥猪、繁殖母猪等,共剖检125头猪,经RT-PCR检测到猪繁殖与呼吸综合征病毒,分离到肺炎克雷伯菌,通过调查,初步确定该猪场的"高热症"是由猪繁殖与呼吸综合症病毒所引发,继发
应用Marc-145细胞从福建某猪场疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病死猪脾脏和淋巴结中分离到一株病毒.该分离毒经Marc-145细胞6次传代后出现稳定的细胞病变(CPE),其TCID50为10-4.25/0.1ml；间接免疫荧光试验表明,感染分离毒的CPE细胞仅与抗PRRSV单克隆抗体反应并出现特异性的胞浆荧光；序列测定表明分离毒的ORF7基因与LV、B13、Ningbo42株的核苷酸同源性分
根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ATCC VR-2332株ORF5基因序列设计1对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增PRRSVHn/06-1分离株ORF5基因片段。将扩增片段克隆到真核表达载体pcDNA3.0中,测序后用DNAstar序列分析。构建的PcDNA-ORF5重组质粒瞬时转染293T细胞,48h后用Western-blot检测,证明ORF5蛋白在293T细胞
从河南省某些发病猪场分别分离到一株狂犬病病毒(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),并进行了鉴定。利用自行分离的PRV和PRRSV作为混合抗原,免疫小鼠后用一次融合、分别筛选的方法,获得了能分别稳定分泌抗2种抗原的单抗杂交瘤细胞株.其中2株抗PRV的单克隆抗体杂交瘤细胞株,3株抗PRRSV的单克隆抗体杂交瘤细胞株.其免疫球蛋白均为IgG2.分泌的抗PRV单克隆抗体与AIV、NDV、PPV
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是引起猪繁殖与呼吸综合征的病原体,本文综述了PRRSV的分子生物学最新研究进展,主要包括PRRSV的基因组结构、病毒蛋白及其功能、病毒的变异、分子生物学诊断、疫苗防治技术的研究等,旨在为该病的研究和控制提供借鉴。
PRRS对养猪业造成的危害越来越大,PRRS疫苗的研究显得越发重要.到目前为止,预防PRRS主要使用的是弱毒活疫苗,但是,正是它的广泛使用,使得PRRS疫情也越来越复杂。本文综述了国内外PRRS弱毒活疫苗的研究进展,以及PRRS弱毒苗的副作用、交叉保护性以及影响因素。
以北美株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆(pCBC)为平台进行反向遗传操作,分别在pCBC的ORF2和ORF3间,ORF5和ORF6间,ORF6和ORF7间插入PCV2的ORF2,依次获得三个嵌合克隆(pCPV,p6PC,p7PC)。转染PRRSV易感细胞MARC-145后得到三个重组病毒,重组病毒在体外培养的共性:遗传不稳定性。继而以重组病毒vCPV为例,利用RT-PCR技术在转录