【摘 要】
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吡咯伯克霍尔德氏菌Lyc2是一株对多种植物病原真菌、细菌具有较强的抑制作用的生防菌株。本研究中,采用EZ-TN5转座子随机突变的方法构建菌株Lyc2插入突变题库,以解淀粉欧文氏
【机 构】
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中国农业科学院烟草研究所; 中国烟草总公司贵州省公司; 山东临沂烟草有限公司; 中国烟草总公司四川省公司;
【基金项目】
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山东省自然科学基金(ZR2018BC037);中国农业科学院烟草研究所青年科学基金项目(2017B03);中国烟草总公司贵州省烟草公司重点科技项目(201920);中国烟草总公司四川省公司重点科技项目(SCYC201703)
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吡咯伯克霍尔德氏菌Lyc2是一株对多种植物病原真菌、细菌具有较强的抑制作用的生防菌株。本研究中,采用EZ-TN5转座子随机突变的方法构建菌株Lyc2插入突变题库,以解淀粉欧文氏菌Erwinia amylovora为指示菌从Lyc2突变体库中筛选失去抗细菌能力的突变体。采用PCR验证转座子基因是否成功插入到菌株Lyc2染色体基因。利用质粒拯救技术克隆转座子插入位点基因,结合全基因组测序结果对插入位点基因(簇)进行预测和生物信息学分析。结果表明:本研究成功构建了吡咯伯克霍尔德氏菌Lyc2随机插入突变体库,筛选得到一株对解淀粉欧文氏菌抑菌效果显著降低的突变体。利用恢复性克隆对突变体Lyc2-MT2918进行突变基因定位分析。序列分析结果表明,发生突变的基因(Glu-2918)负责编码谷胱甘肽合成酶(glutathione synthase)。对突变基因Glu-2918的互补试验表明,导入包含Glu-2918完整基因的重组质粒pM2918可以使突变体恢复对指示菌的拮抗活性,而导入空质粒pMLS7的并不能改变突变体Lyc2-MT2918或者野生型菌株Lyc2的抑菌能力,表明Glu-2918基因对Lyc2菌株拮抗细菌的能力具有重要作用。
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