【摘 要】
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目的 研究在原发性肝癌发生过程中受DNA甲基化调控的lncRNAs对肿瘤形成的影响及其分子机制.方法 甲基化相关的lncRNAs芯片数据进行分析,筛选潜在受DNA甲基化调控异常表达
【机 构】
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第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室,上海,200433
【出 处】
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中华医学会2012年医学遗传学年会暨全国第十一次医学遗传学学术会议
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目的 研究在原发性肝癌发生过程中受DNA甲基化调控的lncRNAs对肿瘤形成的影响及其分子机制.方法 甲基化相关的lncRNAs芯片数据进行分析,筛选潜在受DNA甲基化调控异常表达的lncRNAs.在多种肝细胞系与肝癌肿瘤样本中通过实时定量PCR技术检测这些lncRNAs的表达量改变；亚硫酸氢盐修饰与甲基化测序技术检测甲基化水平改变.进而通过siRNA干扰及全长载体质粒的构建在细胞水平对lncRNAs进行干扰及过表达后分析肿瘤表型：利用CCK-8法检测细胞的增殖能力；Transwell小室检测细胞的迁移、侵袭能力；Annexin-FITC荧光法检测细胞凋亡.利用UCSC基因组数据库分析lncRNAs的全长序列、结构位置、启动子区CpG岛、DNA甲基化相关转录因子等信息,继而通过双荧光素酶报告技术检测目的基因与转录因子的相互关系及结合方式.利用RNA pull-down技术筛选与lncRNAs相结合的靶蛋白分子,分析其与lncRNAs的作用方式.结果 筛选出了lncRNA-AY927547,其在肝癌细胞系及肝癌组织中的表达量较之正常肝细胞系及癌旁组织呈明显下调,且甲基化程度明显增高.干扰lncRNA-AY927547后,肿瘤细胞增殖能力受到促进,迁移及侵袭能力受到明显促进,凋亡差异不明显.过表达IncRNA-AY927547后,肿瘤细胞增殖能力受到抑制,迁移及侵袭能力受到明显抑制,凋亡差异不明显.结构位置分析显示lncRNA-AY927547位于基因LMTK3的反义链上,在干扰及过表达IncRNA-AY927547后,其表达量水平与基因LMTK3呈明显负相关,提示两者之间的相互抑制,且与lncRNA-AY927547正义链及反义链相结合的蛋白谱呈明显差异.生物信息学分析提示lncRNA-AY927547的甲基化改变与转录因子Sp1、MEF-2有关.结论 IncRNA-AY927547能够受到与转录因子相关的DNA甲基化的调控,在原发性肝癌的发生及转移过程中通过其反义链基因LMTK3及其他结合蛋白发挥抑癌基因的作用,为发展表观遗传学药物治疗原发性肝癌提供了新的思路和靶向.
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