TRPC通道对于丙泊酚引起的皮质神经元毒性作用的影响

来源 :中国医师协会麻醉学医师分会2016年中青年论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zjqzc
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  目的:构建丙泊酚体外培养皮质神经元毒性模型及探讨TRPC通道的活化对模型的作用.方法:实验一:将培养至7d的神经元随机分为八组,对照组(C组)正常培养,溶剂组(D组)加入0.1%DMSO,不同浓度丙泊酚培养组(Pi-6组),终浓度分别为1、5、1 0、50、1 00、200umol/l,P1-6组于7d后加入不同剂量丙泊酚孵育6h,CCK-8鉴定细胞生存率,流式细胞学检测细胞凋亡率,构建细胞毒性模型.实验二:取培养至第7d皮质神经元,随机分为4组,C组作为对照组;Pioo(丙泊酚组)为加入含100 u M的丙泊酚;Pioo+SKf组(拮抗剂组)为加入丙泊酚前先用20μM的SKF96365处理15min,而后加入100 u M丙泊酚孵育6h;PIOO+OAG组(激动剂组)为加入丙泊酚前先用100 u M的OAG处理10min,而后加入100 u M丙泊酚孵育6h,CCK-8检测细胞生存率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测TRPC6蛋白表达情况,结果:实验一:相比对照组,单纯加入0.1%DMSO对神经元生存率与凋亡率均无影响(P>0.05);与溶剂组D组比较,1μM丙泊酚孵育6h对神经元生存率与凋亡率无影响(P>0.05);5、1 0、50、1 00、200 u M丙泊酚孵育6h,皮质神经元细胞生存率呈浓度依赖性降低(P<0.05),凋亡率呈浓度依赖性增高(P<0.05).实验二:与P100组比较,Pioo+SKF组细胞生存率下降,凋亡率增加,差异均有统计学意义(P< 0.05或P<0.01);与Pioo组比较,PIOO+OAG组细胞生存率上升,凋亡率下降,差异均有统计学意义(P< 0.05或P<0.01);Western blot显示C组、Pioo组、Pioo+SKF、PIOO+OAG皆有表达TRPC6蛋白,Pioo组表达略有下降,与C组比较,无统计学意义;而Pioo+SKF组TRPC6蛋白表达下降更多,PIOO+OAG表达增加,与C组比较,皆有统计学意义(P<0.05).结论:1:丙泊酚对体外培养7天的皮质神经元有毒性作用,低浓度(1μM)孵育6h对细胞生存率无影响,高浓度(5、10、50、100、200μM)可抑制细胞生存率,增加细胞凋亡率.2:TRPC通道活化可减少丙泊酚在100 u M浓度下对于体外培养皮质神经元的凋亡,提高其生存率,且TRPC6通道与其关系密切.
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