【摘 要】
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目的建立氯化镧诱导新生大鼠皮质神经元氧化应激模型,研究氯化镧诱导神经元氧化应激对JNK信号通路和自噬相关蛋白的影响,并研究其可能的信号变化。方法大鼠皮质神经元的分离和原代培养,并建立氯化镧诱导的神经元氧化应激模型:以不同浓度(0,0.125,0.25,0.5)mmol/L氯化镧处理原代神经元24小时后,以MTT法测神经元存活率、细胞形态学电镜观察自噬小体数量和胞内活性氧(ROS)浓度测定等为指标评
【出 处】
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环境与健康学术会议--精准环境健康：跨学科合作的挑战论文汇编
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目的建立氯化镧诱导新生大鼠皮质神经元氧化应激模型,研究氯化镧诱导神经元氧化应激对JNK信号通路和自噬相关蛋白的影响,并研究其可能的信号变化。方法大鼠皮质神经元的分离和原代培养,并建立氯化镧诱导的神经元氧化应激模型:以不同浓度(0,0.125,0.25,0.5)mmol/L氯化镧处理原代神经元24小时后,以MTT法测神经元存活率、细胞形态学电镜观察自噬小体数量和胞内活性氧(ROS)浓度测定等为指标评价氯化镧诱导神经元内氧化应激对细胞自噬的影响;并通过蛋白免疫印迹法(Western blotting,WB)分别检测蛋白水平变化,JNK通路蛋白(FOXO1、c-jun、JNK)以及它们各自的磷酸化形式的水平;逆转录聚合酶链式反应(reverse transefiptionpolymerasechain reaction,RT-PCR)观察上述蛋白对应基因mRNA水平的表达。另外,使用ROS抑制剂SP600125预处理神经元,再测定上述相关蛋白和基因的mRNA改变,从而探讨氯化镧诱导神经元氧化应激作用是否和上述JNK信号通路和自噬相关蛋白的表达改变有关。结果随着氯化镧剂量增加,细胞存活率下降;自噬小体在高剂量组显著增加;ROS水平也随剂量增加明显升高,相关蛋白磷酸化明显上调;与同剂量氯化镧组比较,ROS抑制剂能显著降低ROS水平,下调相关磷酸化蛋白表达,在一定程度上抑制了自噬的发生。结论氯化镧可能通过ROS/JNK途径诱导细胞自噬发生。
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