【摘 要】
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目的 在多种肿瘤中存在A激酶锚定蛋白12 (AKAP12)的表达下调和启动子区高甲基化现象.本文旨在探讨前列腺癌组织和细胞中AKAP12基因表达、甲基化及其临床意义.方法 建立甲基化敏感性高分辨率熔解曲线(MS-HRM)法(图1),并定量检测78例前列腺癌(PCa)患者、22例前列腺增生(BPH)患者和22名例正常对照组织中AKAP12的甲基化水平,并分析评价其与病理资料的关系.同时RT-PCR和
【机 构】
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复旦大学附属华山医院检验医学科,上海 200040 复旦大学附属华山医院泌尿外科,上海 20004
【出 处】
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中国工程科技论坛第115场——临床分子诊断暨第二届中国分子诊断技术大会
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目的 在多种肿瘤中存在A激酶锚定蛋白12 (AKAP12)的表达下调和启动子区高甲基化现象.本文旨在探讨前列腺癌组织和细胞中AKAP12基因表达、甲基化及其临床意义.方法 建立甲基化敏感性高分辨率熔解曲线(MS-HRM)法(图1),并定量检测78例前列腺癌(PCa)患者、22例前列腺增生(BPH)患者和22名例正常对照组织中AKAP12的甲基化水平,并分析评价其与病理资料的关系.同时RT-PCR和MS-HRM法分析甲基化酶抑制剂(5-aza-dC)处理前后前列腺癌细胞株PC-3,DU145,LNCaP和22RV1中AKAP12基因的表达及其启动子区甲基化情况.并对MS-HRM法的重复性和与传统MSP法检测的灵敏度和检出率进行比较.结果 MS-HRM法从78例前列腺癌患者中检测到47例(60.2％),22例前列腺增生患者中检测到5例(22.7％)中存在AKAP12启动子区域不同程度的甲基化,22例正常对照中仅检测到甲基化＜10％的2例(9.1％).AKAP12甲基化在PCa中明显高于在BPH或者正常对照组织中(P＜0,01).AKAP12甲基化水平与前列腺癌患者的年龄、pT分级和血清前列腺特异性抗原(PSA)无统计学意义(P＞0.05),但与前列腺癌的Gleason系数相关(P=0.015,图2).RT-PCR显示PC-3和DU-145细胞中表达AKAP12,而LNCaP和22RV1没有表达,却存在启动子区域甲基化现象.LNCaP细胞经过5-aza-dC处理后,甲基化明显下降而AKAP12表达明显上升.MS-HRM法检测AKAP12甲基化的灵敏度(1％)优于传统的MSP法(10％).结论本研究证实前列腺在中存在AKAP12启动子高甲基化并与Gleason系数相关,有可能成为前列腺癌恶性程度监测潜在的分子标志物.
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