蓝舌病(Bluetongue, BT)是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)引起,以高热、白细胞减少、黏膜溃疡性炎症变化等为主要症状的反刍动物传染性疾病。由库蠓等昆虫传播的非接触性传染病,主要在绵羊、山羊等反刍动物中传播。目前,蓝舌病已被国际动物组织(OIE)列为法定报告的多种动物共患病之一,该病严重危害我国畜牧业和国际动物及其产品进出口贸易的发展。BTV分为10个节段,主要编码7种结构蛋白(VP1～VP7)和4种非结构蛋白(NS1、NS2、NS3/NS3a和NS4)。其中,由L2基因编码的vp2可诱导产生中和抗体,是BTV型特异性抗原主要的决定因素。由于BTV中存在大量的基因变异和抗原变异,导致其有26个不同的血清型,并且同一血清型内含有大量的变异毒株。而不同血清型间又缺乏有效的交叉免疫保护,因此新的BTV疫苗的研制迫在眉睫。在本研究中,我们利用基因工程技术获得重组BTV16-VP2蛋白,为研制新型BTV基因工程疫苗和亚单位疫苗奠定基础。本实验采用常规PCR方法,以L2基因为模板扩增出大小为2800bp的目的片段,将获得的目的基因定向克隆至载体PET-28a。对重组质粒进行鉴定,将阳性重组质粒克隆至BL21感受态进行表达,用IPTG诱导,获得了大小约为116KD的重组蛋白。经SDS-PAGE和Western blot证实该重组蛋白与预期蛋白大小一致,且能与BTV阳性羊血清发生特异性反应。用重组蛋白作为免疫原,采用静脉注射的方法免疫BALB/c小鼠。最后,通过细胞融合技术融合骨髓瘤细胞SP2/0与免疫后的脾细胞。采用有限稀释法进行细胞亚克隆,获得能稳定产生抗体的杂交瘤细胞。通过间接ELISA方法筛选、免疫荧光实验验证,获得了两株单克隆抗体。结果表明本实验所制备的单克隆抗体具有良好的特异性,为BTV 16型血清型的检测方法的建立及VP2蛋白的结构与功能研究奠定了基础。