【摘 要】
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目的：研究丹参酚酸B对游离脂肪酸诱导的大鼠肝细胞脂质沉积和凋亡的作用及其机制.方法：采用肝脏原位胶原酶灌注法分离大鼠原代肝细胞.原代肝细胞和HepG2均分为正常对照组、油酸组、油酸+丹参酚酸B组、油酸+SP600125(JNK抑制剂)组、丹参酚酸B组、SP600125组、棕榈酸组、棕榈酸+丹参酚酸B组、棕榈酸+SP600125组、DMSO对照组.油酸及棕榈酸刺激原代肝细胞的浓度为250umol/L
【机 构】
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上海中医药大学附属普陀医院感染科 200062
【出 处】
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第二十一次全国中西医结合肝病学术会议
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目的：研究丹参酚酸B对游离脂肪酸诱导的大鼠肝细胞脂质沉积和凋亡的作用及其机制.方法：采用肝脏原位胶原酶灌注法分离大鼠原代肝细胞.原代肝细胞和HepG2均分为正常对照组、油酸组、油酸+丹参酚酸B组、油酸+SP600125(JNK抑制剂)组、丹参酚酸B组、SP600125组、棕榈酸组、棕榈酸+丹参酚酸B组、棕榈酸+SP600125组、DMSO对照组.油酸及棕榈酸刺激原代肝细胞的浓度为250umol/L、刺激HepG2的浓度为500umol/L；丹参酚酸B的浓度为10-6mol/L； SP600125的浓度为10umol/L.观察①油红0染色：丹参酚酸B对FFA刺激的肝细胞内脂滴变化的影响；②ELISA法：丹参酚酸B对FFA诱导的肝细胞凋亡的影响；③高内涵筛选Hoechst33258染色：丹参酚酸B对FFA诱导的肝细胞凋亡的影响；④Western blot：丹参酚酸B对FFA刺激的肝细胞内JNK、p-JNK表达的影响.结果：①油红0染色显示：与正常对照组比较,油酸、棕榈酸作用于原代肝细胞、HepG2细胞24h后,细胞内脂滴含量显著增加(P均＜0.01).丹参酚酸可显著减少油酸、棕榈酸诱导的原代肝细胞、HepG2细胞内脂滴的含量(P＜0.01,P＜0.05).②ELISA检测结果：与正常对照组相比,油酸组及棕榈酸组原代肝细胞、HepG2细胞吸光值[Absorbance (A405nm-A490nm)]显著增高,细胞凋亡明显(P均＜0.01)；丹参酚酸B显著抑制油酸、棕榈酸诱导的原代肝细胞、HepG2细胞凋亡(P＜0.05,P＜0.01).③高内涵筛选Hoechst33258染色：正常对照组细胞核形态无明显变化,着色很浅或呈正常的蓝色,染色均匀；油酸组及棕榈酸组肝细胞凋亡明显,细胞核减小(核固缩),细胞核呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染.与正常对照组比较,油酸、棕榈酸组细胞核平均荧光强度值及凋亡率明显增高(P均＜0.01).丹参酚酸B显著降低油酸、棕榈酸刺激的原代肝细胞细胞核平均荧光强度值及凋亡率(P＜0.05,P＜0.01).HepG2细胞检测结果与原代肝细胞趋势一致.④Western blot结果：与正常对照组比较,油酸、棕榈酸刺激原代肝细胞2h、24h时可显著促进p-JNK的表达(P均＜0.01).丹参酚酸B对油酸、棕榈酸刺激原代肝细胞2h、24h时p-JNK的表达有显著抑制作用(P均＜0.01).HepG2细胞p-JNK结果与原代肝细胞趋势一致.结论：①丹参酚酸B能够抑制游离脂肪酸诱导的肝细胞内脂滴增加及肝细胞凋亡.②丹参酚酸B能够抑制游离脂肪酸诱导的肝细胞内JNK的活化.二者是丹参酚酸B防治非酒精性脂肪性肝炎的重要机制.
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