非接触共培养脊索细胞诱导骨髓间充质干细胞向类软骨细胞分化的实验研究

来源 :全国骨关节与风湿病暨第三届武汉国际骨科高峰论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ggf9988998
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  目的:分离兔髓核脊索细胞(NC)及骨髓间充质干细胞(MSC),通过非接触共培养探讨脊索细胞对MSC细胞表型的影响.方法:取4~6周龄新西兰兔8只,取胸腰段脊柱的髓核,用密度梯度离心提取脊索细胞,同时取其股骨骨髓用FICOLL液分离,光镜观察脊索细胞和MSC等比例(1:1)非接触共培养条件下的生长情况.对非接触共培养(1:1)和单独培养的MSC行免疫组化及RT-PCR、Western-blot检测MSC的细胞表型的改变情况.结果:原代脊索细胞呈圆形或椭圆形,细胞体积大,细胞增殖不明显.MSC呈梭形贴壁生长,呈三角形或梭形,旋涡状排列,两端呈尖性突起,细胞折光性较差.非接触共培养后,行甲苯胺蓝染色MSC单独培养组呈阴性,与NC非接触共培养的MSC组呈阳性.Ⅱ型胶原免疫组化MSC单独培养组呈阴性,与NC非接触共培养的MSC组呈阳性呈阳性.通过RT-PCR、Western-blot在基因及蛋白水平检测后发现:非接触共培养的MSC组其Ⅱ型胶原及蛋白聚糖的表达明显增多,与对照组有显著性差异(p<0.05).结论 在非接触共培养条件下脊索细胞可以诱导MSC向类软骨细胞方向分化,为组织工程化髓核的种子细胞筛选提供新选择.
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