牙龈卟啉单胞菌脂多糖促进大鼠血管平滑肌细胞增殖和矿化的实验研究

来源 :2014全国口腔生物医学学术年会暨“西湖国际”口腔医学高峰论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shushuclover1
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  目的 慢性牙周炎是心血管疾病的独立危险因素,本研究旨在探讨牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-lps)对体外培养的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和矿化的影响,为临床牙周疾病及心血管疾病的相互影响和防治提供依据.方法:本研究采用组织块贴壁法体外培养大鼠VSMCs,传代培养并采用免疫组化法鉴定.将使用不同浓度Pg-lps(0、1、10、100、1000、10000ng/ml)培养液体外培养的VSMCs分为六组,采用CCK8试剂盒检测各组VSMCs的增殖速度.并采用Pg-lps(0、1ng/ml、 1ug/ml)三组培养,采用碱性磷酸酶试剂盒检测其ALP活性.采用Pg-lps(0、1ng/ml、1ug/ml)、地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠诱导VSMCs成骨分化,并设对照组;培养21 d后进行钙化结节茜素红染色,并进行矿化结节定量检测.采用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别观察Pg-lps对VSMCs骨向分化相关基因碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)以及骨桥蛋白(OPN) mRNA表达变化.结果:CCK-8结果示:1天后(1-10000ng/ml)Pg-lps均显著促进VSMCs增值,并随时间的延长,促进作用越明显.ALP检测结果示:(1ng/ml、1ug/ml) Pg-lps在(0.5-4天)均显著促进VSMCs的ALP活性,随着时间的延长促进作用更明显,且4天时1ug/ml较1ng/ml对ALP活性促进作用更显著.茜素红染色及矿化结节定量结果示:矿化诱导组较普通培养组VSMCs矿化结节量明显增多,且在不同培养下,(1ng/ml、1ug/ml)Pg-lps均促进其矿化结节的形成.RT-PCR结果示:ALP在矿化诱导组较普通培养组在1、2和7天明显增高,且在不同培养下(1ng/ml、1ug/ml) Pg-lps均促进ALP的表达;BSP在矿化诱导组较普通培养组在1天和2天时明显增高,且在不同培养下(1ng/ml、1ug/ml)Pg-lps均促进ALP的表达,第7天时,矿化诱导对照组明显高于普通培养对照组,但普通培养(1ng/ml、 1ug/ml)Pg-lps明显高于矿化诱导对照组,却与矿化诱导组(1ng/ml、1ug/ml)Pg-lps间无统计学差异;OPN在矿化诱导组较普通培养组在1天和2天时明显增高,且第2天增强更明显,第7表达增强不明显,而在1天和2天时(1ng/ml、1ug/ml)Pg-lps不同培养下均促进其表达,第7天时普通培养下(1ng/ml、 1ug/ml)Pg-lps促进其表达,而矿化诱导组反而抑制其表达.结论:Pg-lps能促进VSMCs的异常增殖;还可能通过促进VSMCs的ALP活性及相关矿化基因ALP、BSP和OPN的表达而影响其矿化过程,加速VSNCs的矿化;进而提示Pg-lps对心血管疾病的发生发展可能有重要作用,并表明牙周病对心血管疾病的发生发展有一定的促进作用,临床上应该控制牙周优势菌浓度,降低其对心血管疾病的影响.
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