【摘 要】
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RNA-mediated virus resistance based on natural antiviral RNA silencing has been exploited as a powerful tool for engineering virus resistance in plants.In this study, a conserved 3-region (positions 9
【机 构】
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Key Laboratory of Biology and Genetic Resources of Tropical Crops,Ministry of Agriculture,Institute
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RNA-mediated virus resistance based on natural antiviral RNA silencing has been exploited as a powerful tool for engineering virus resistance in plants.In this study, a conserved 3-region (positions 9839-10117, 279 nt) of the capsid protein (CP) gene of Papaya ringspot virus (PRSV), designated CP279, was used to generate an intron-containing hairpin RNA (ihpRNA) construct by one-step, zero-background ligation-independent cloning (OZ-LIC).The RNaseⅢ-deficient E.coli strain M-JM1091acY was identified as the best choice for producing large quantities of specific ihpRNA-CP279.Resistance analyses and ELISA data verified that most papaya plants mechanically coinoculated with TRIzol-extracted ihpRNA-CP279 and PRSV were resistant to PRSV, and resistance was maintained throughout the test period (>2 months post-inoculation).In contrast, a 1-2-day interval between sequential inoculation of PRSV and ihpRNA-CP279 did not result in complete protection against PRSV infection, but delayed the appearance of viral symptoms by 3 to 4 days.These findings indicate that direct mechanical inoculation of nontransgenic papaya plants with bacterially-expressed ihpRNA-CP279 targeting the PRSV CP gene can interfere with virus infection.This work lays a foundation for developing a non-transgenic approach to control PRSV by directly spraying plants with ihpRNA or crude bacterial extract preparations.
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