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背景:细胞毒性是医疗器械生物相容性评价的重要项目之一,包括浸提液法、直接接触法、间接接触法,其中浸提液法是检测中最常使用的方法,GB/T14233.2-2005给出了MTT法和显微镜观察法的SOP,目前国内广泛采用这两种方法对医疗器械进行细胞毒性评价。ISO 10993-5:2009较1999年版本详细给出了MTT法细胞毒性试验的SOP,该方法与GB/T14233.2-2005有较大不同。目的:探讨GB/T14233.2-2005中MTT法、显微镜观察法和ISO 10993-5:2009中MTT法在医疗器械细胞毒性评价中结果的差异。方法:本研究共选用10种医疗器械产品,包括表面接触器械(口罩、吸氧面罩、雾化器、吸痰管、止血海绵)和外部接入器械(输液器2种、引流管、留置针、注射器)。选用L929细胞,培养液为含10%胎牛血清的DMEM,其余步骤分别按GB/T14233.2-2005 MTT法、显微镜观察法和ISO10993-5:2009 MTT法标准中的SOP操作,按顺序分别定为方法一、方法二、方法三。三种方法最大的不同是细胞接种密度不一样(1×10~4、1×10~5个细胞/m1)和细胞检测时间终点不一样(72h、24h)。方法一细胞接种密度为1×10~4个细胞/ml,检测时间为72h;方法二细胞接种密度为1×10~5个细胞/ml,检测时间为72h;方法三细胞接种密度为1×10~5个细胞/ml,检测时间为24h。结果:1)上述3种方法中,方法一样品合格率为30%,方法二合格率为90%,方法三样品合格率为70%。2)3种方法均合格的为3种,三种均不合格的1种,一致率为40%。3)其余6种产品方法一均不合格,方法二均合格,方法三4种合格,2种不合格。结论:方法一因接种密度低,细胞尚未达到对数期对外界的刺激敏感致假阳性率增加;方法二因检测时间终点过长,当待检物对细胞只有抑制作用而非杀伤作用时,经过较长时间的培养后,细胞的增殖会赶上对照组,致假阴性率增加;方法三避免了其他2种方法的不足,从而能够得到更加客观的结果。