【摘 要】
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目的：①突变体Q738X-hERG钾通道的功能鉴定；②探讨丙泊酚对hERG钾通道的作用及机制.方法：利用PCR定点突变技术、全细胞膜片钳技术、Werstern blot、激光共聚焦技术和免疫共
【机 构】
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郑州大学基础医学院药理教研室,450001
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目的：①突变体Q738X-hERG钾通道的功能鉴定；②探讨丙泊酚对hERG钾通道的作用及机制.方法：利用PCR定点突变技术、全细胞膜片钳技术、Werstern blot、激光共聚焦技术和免疫共沉淀技术,观察突变体Q738X的功能、蛋白在细胞内的表达、定位和运输情况,以及丙泊酚对野生型 WT-hERG、突变型 Y652A 和 F656C-hERG 和共转染型WT/Q738X-hERG 钾通道的电生理影响、hERG 蛋白表达和定位的变化.结果：1.在单独表达有突变型Q738X-hERG 的 HEK-293 细胞中记录不到电流.2.当浓度为0.01,0.1,1,3,10,30,100,300,1000和3000μM时，丙泊酚可浓度依赖性抑制WT-hERG和WT/Q738X-hERG钾通道，其IC50值分别为60.9±6.4μM和14.2±2.8μM；丙泊酚不影响WT-hERG蛋白的运输过程；同等浓度下(100μM)，丙泊酚与对突变体Y652和F656的抑制率降低。结论：①突变体Q738X导致hERG蛋白功能的丧失，属运输障碍；②丙泊酚浓度依赖性抑制WT-hERG电流；丙泊酚与位点Y652和F656有高亲和力；其对WT-hERG蛋白的运输无影响；③Q738X突变可增强丙泊酚对hERG蛋白的抑制作用。
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