论文部分内容阅读
目的：二硫化碳(CS2)是一种工业上广泛应用的有机溶剂,也是重要的化工生产原料,在粘胶纤维的生产和加工过程中女工接触人数众多.流行病学研究结果表明,接触CS2女工自然流产率、早早孕丢失率、子代先天缺陷率均明显高于对照人群,提示CS2具有生殖和发育毒性.本项研究旨在通过分析粘附分子、粘附分子相关蛋白、免疫耐受、DNA损伤、氧化应激、激素以及受体表达水平与胚胎植入障碍之间的关系,探讨CS2致胚胎毒性作用机制.
方法：1.建立小鼠动物模型.分解小鼠生殖阶段,分别于卵泡发育期、胚胎植入期等不同生殖时期染毒CS2建立胚胎植入障碍模型,观察孕第9天胚胎植入和发育情况.同时,观察同一时间点染毒后不同胚胎发育阶段胚胎植入和发育情况,以观察CS2致胚胎损伤的变化规律.2.应用SDS-PAGE、western blotting和RT-PCR等方法分别测定胚胎和子宫组织中粘附分子纤维粘连蛋白(FN)及其受体蛋白整合素β1和β3、MMP-2和MMP-9,粘附分子相关蛋白(LIF、CT、HOXA-10、survivin),DNA甲基化酶和激素受体(PR、ER)的表达水平.3.采用单细胞凝胶电泳技术检测不同生殖阶段染毒和植入期染毒小鼠子宫内膜细胞和脾脏组织DNA损伤情况,并应用彗星荧光原位杂交技术(Comet-FISH)检测LIF基因完整性.4.采用酶联免疫吸附法(ELISA)及分光光度法检测小鼠血清雌孕激素及子宫组织中Th1型细胞因子干扰素-γ(INF-γ)和Th2型细胞因子白细胞介素-10(IL-10)的含量变化情况及子宫组织氧化应激水平.
结果：①胚胎植入期特别是胚胎植入晚期染毒CS2导致胚胎植入数目明显降低,提示胚胎植入期是CS2致胚胎毒性反应的敏感时期;②染毒CS2可明显减少胚胎和子宫组织中粘附分子FN、整合素β1和β3的表达,同时发现LIF、CT、HOXA-10、survivin等粘附分子相关蛋白表达水平异常,且LIF基因发生断裂,影响胚泡的粘附性、侵入性以及子宫内膜对胚泡的接受性;③CS2致染毒动物子宫内膜细胞DNA损伤,并且随着染毒剂量的增加损伤程度也明显增加,并出现植入期染毒后的DNA损伤,表明胚胎植入期暴露于CS2可通过损伤子宫内膜细胞DNA而致胚胎植入障碍;④围植入期不同时间暴露于CS2均可导致孕鼠子宫组织发生明显的氧化应激反应,并且导致子宫组织甲基化水平变化,表明CS2可改变子宫组织氧化应激和甲基化水平导致胚胎植入障碍;⑤CS2暴露可引起小鼠子宫组织Th1型免疫反应增强,Th2型免疫反应减弱,同时发现染毒小鼠脾脏淋巴细胞呈现不同程度的DNA损伤,表明CS2可改变母体免疫耐受状况导致胚胎植入障碍;⑥围植入期CS2暴露可引起孕鼠血清雌孕激素水平的下降及激素受体的异常表达,表明CS2可改变母体激素水平导致胚胎植入障碍.
结论：CS2暴露可导致明显的胚胎植入障碍,其毒作用机制是多因素共同作用的结果.