急性低氧暴露小鼠血清3种B族维生素的HPLC法测定

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目的:用高效液相色谱方法(HPLC)测定联合补充维生素后急性低氧暴露小鼠血清中硫胺素(VB1)、核黄素(VB2)、烟酰胺的含量。方法:健康雄性昆明小鼠50只(体重14g~16g),于清洁级动物房饲养(室温22±2℃,湿度30%~40%,光–暗周期12h)。适应性喂养4天后,随机分为五组:正常对照组、低氧对照组、2倍、4倍及8倍VB1、VB2、烟酰胺补充组,每组10只,喂养14天后,正常对照组仍在常压动物房饲养,低氧对照组及VB1、VB2、烟酰胺补充组动物进入低压氧舱,进行8小时的模拟高度为6000m的减压低氧暴露,暴露结束后采取眼眶后静脉丛血,小鼠血清样品经Strata-X聚合物固相萃取柱(30mg/ml)处理后收集洗脱液进样分析。采用Phenomenex/Luna C18色谱柱(150 mm×4.6 mm, 3μm)分离,以50mmol/L醋酸铵︰甲醇(99︰1,v/v)为流动相A,甲醇︰水(50︰50,v/v)为流动相B梯度洗脱,流速为0.6 ml/min,光电二极管阵列检测器检测波长设为VB1270 nm、烟酰胺256 nm,荧光检测器Ex450、Em520检测VB2。结果:急性低氧暴露后,小鼠血清VB1变化不明显,VB2含量显著降低,烟酰胺水平有降低的趋势;与低氧对照组相比,2倍、4倍及8倍补充组血清VB1、VB2含量明显上升、8倍维生素补充组血清烟酰胺含量有升高趋势;结论:急性低氧暴露后小鼠VB1、VB2、烟酰胺的营养状况发生了显著变化,补充VB1、B2、烟酰胺对这些变化具有一定的改善作用。
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