壮骨关节丸干预骨性关节炎模型的超微结构观察

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目的:骨性关节炎为中老年常见骨关节疾病,通过观察中成药壮骨关节丸干预骨性关节炎模型的超微结构的变化,探讨壮骨关节丸治疗骨性关节炎的作用机理。方法:通过采用改良Hulth法造大白兔膝关节骨性关节炎模型。实验分组及干预措施:①正常对照组:正常饲养,不给予任何处理。②关节炎模型组:采用改良Hulth法造模,取兔左膝关节内侧入路,切断内侧副韧带,摘除内侧半月板,切断前交叉韧带。术后连续3天给青霉素20万u肌肉注射,1周后开始每天强迫兔活动0.5h,连续15周。③壮骨关节丸干预组:造模成功后,壮骨关节丸水溶液5ml(含壮骨关节丸1g)灌胃,每日1次,持续15周。透射电镜制样与观察:切取股骨内髁软骨及软骨下骨组织1x1x3mm~3(长轴与软骨面平行),3%戊二醛-1.5%多聚甲醛前固定,5.5%EDTA-1.5%戊二醛脱钙-固定,1%四氧化锇后固定,环氧树脂包埋;半薄切片1um,甲苯胺蓝染色,光镜观察细微结构并定位;超薄切片70nm,铀-铅染色,日立H-7650型透射电镜观察骨组织相关细胞与基质成分的超微结构变化,SIS公司2Kx2K CCD相机拍摄。结果:正常对照组:软骨细胞胞体较大,呈卵圆形或多角形,细胞表面可见较多短突起,伸向软骨陷窝壁。核内常染色质细微,异染色质多见;胞质内粗面内质网有些扩张成池状,表面附着较多的核糖体;高尔基复合体可见,线粒体呈圆形且较少,可见糖原颗粒。软骨及软骨下骨交界处,有低电子密度与深电子密度相邻的骨基质区域,其纤维排列方向不一致。低电子密度肢原纤维束中的胶原原纤维粗细相彷,均与纤维束呈同一走向;深电子密度胶原纤维束中的胶原原纤维走向不规则,呈斜形、横形交错。成骨细胞呈不规则形,胞内可见较多的轻度扩张的粗面内质网及高尔基复合体。骨细胞呈扁椭圆形,突起较多,细胞器较少。偶见圆形哈佛氏管。关节炎模型组:软骨细胞胞体较大,呈多角形,突起较少;细胞核变形、固缩,或异染色质边聚,呈凋亡细胞核;胞质中粗面内质网有些扩张成池状,有脱颗粒现象;糖原聚集。软骨及软骨下骨交界处,成骨细胞呈椭圆形或不规则形,见少量突起;细胞核呈椭圆形,以异染色质为主,聚于核膜下;胞质内可见较多轻度扩张的粗面内质网。骨细胞呈扁椭圆形或不规则形,突起较少,其周边可见骨小管断面;细胞核呈不规则形,异染色质斑块状,多靠核膜;细胞质内细胞器较少,结构较模糊。(图1.2.3)。壮骨关节丸干预组:软骨细胞呈扁平或椭圆形,胞膜可见少量突起;核形状不规则,异染色质聚集不明显,常染色质为主,未见明显凋亡现象;粗面内质网扩张成池状,胞质内见糖原。软骨及软骨下骨交界处,有低电子密度与深电子密度相邻的骨基质区域,其纤维排列方向不一致。成骨细胞呈椭圆形,突起较少;细胞核呈椭圆形,核内以常染色质为主,异染色质多于核膜下,核仁未见;粗面内质网可见,以核周为多,有些扩张成池状,未见明显脱颗粒现象;线粒体少见。骨细胞呈椭圆形或不规则形,突起较多,可见骨小管的断面;核内常染色质较少,以异染色质为主,多于核膜下。粗面内质网可见,有些扩大成池状,未见明显脱颗粒现象。(图4.5.6)。结论:中成药壮骨关节丸能改善骨性关节炎的软骨与软骨下骨形态,减少软骨细胞的凋亡。
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