CGRP-Sr-CPC促进血管内皮细胞体外血管生成的作用及机制研究

来源 :中华医学会第十七届骨科学术会议暨第十届COA国际学术大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:soochow_deer
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  目的应用掺锶(Sr/Sr+Ca=10%)的磷酸钙骨水泥(Sr-CPC)吸附降钙素基因相关肽(CGRP)制备新型负载降钙素基因相关肽-锶-磷酸钙骨水泥(CGRP-Sr-CPC)生物材料,观察其对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)的成血管作用.初步探讨其在骨组织工程中的应用价值方法体外分离获取HUVECs,采用流式细胞计数鉴定细胞表达标记物CD31、vWF,采用细胞免疫荧光检测其CGRP受体l的表达.ICP法检测CGRP-Sr-CPC中Sr的释放规律,ELISA法检测CGRP-Sr-CPC中CGRP的释放规律.体外成管实验检测CGRP-Sr-CPC浸提液的成血管作用,ELISA法检测CGRP-Sr-CPC浸提液直接作用于HUVECs时血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的分泌水平.QPCR检测CGRP-Sr-CPC刺激HUVECs不同时间点VEGF、VEGF受体l(FLT1)、VEGF受体2(KDR)及CGRP受体lmRNA的表达.Westernblot检测HUVECs不同时间点FLT1、KDR的蛋白表达.结果体外分离获取较高纯度的HUVECs,细胞免疫荧光显示HUVECs表达CGRP受体1.ICP显示Sr随材料降解逐渐释放,ELISA显示CGRP随材料降解呈一过性释放.体外成管实验显示CGRP-Sr-CPC有明显的成血管作用.ELISA显示CGRP-Sr-CPC能明显促进HUVEC分泌VEGF.QPCR结果显示CGRP-Sr-CPC组CGRP受体lmRNA的表达较对照组增高,且在第10天最为明显;Q-PCR及Westernblot结果显示不同浓度组FLT1、KDRmRNA和蛋白的表达在各时间点较对照组均增高.结论负载了CGRP的Sr-CPC能明显促进HUVECs的体外生成血管.可能与其促进VEGF分泌,增强HUVECs的FLT1与KDR表达有关;同时,CGRP受体表达也增加,可进一步增强CGRP的促血管生成作用.
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