【摘 要】
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目的：克隆并异源表达万古霉素糖基转移酶基因gtfE,建立其转糖反应的体外测活方法。方法：从万古霉素总DNA中克隆糖基转移酶基因gtfE,并连入pET37b构建表达载体和菌株,将表达的重组蛋白以亲和色谱分离纯化,用LC-MS检测其活性。结果：成功建立了万古霉素糖基转移酶基因gtfE体外转糖反应模型,该模型可以体外转化尿苷二磷酸葡萄糖,LC-MS确定为葡萄糖万古霉素；但不能转化鸟苷二磷酸D型廿露糖。结
【机 构】
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Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry,Shanghai 200040
【出 处】
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上海市药学会抗生素专业委员会首届青年学术论坛
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目的：克隆并异源表达万古霉素糖基转移酶基因gtfE,建立其转糖反应的体外测活方法。方法：从万古霉素总DNA中克隆糖基转移酶基因gtfE,并连入pET37b构建表达载体和菌株,将表达的重组蛋白以亲和色谱分离纯化,用LC-MS检测其活性。结果：成功建立了万古霉素糖基转移酶基因gtfE体外转糖反应模型,该模型可以体外转化尿苷二磷酸葡萄糖,LC-MS确定为葡萄糖万古霉素；但不能转化鸟苷二磷酸D型廿露糖。结论：异源表达的万古霉素糖基转移酶GtfE具有良好的活性,其体外测活方法快捷可靠,为获得糖基多样性的万古霉素打下基础。
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建立了检测猪肉中5种α2受体激动剂的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC/MS/MS)分析方法。样品加入碱性缓冲液,在再经过乙酸乙酯提取,浓缩、净化后用乙腈-0.2％甲酸溶解,经超高效液相色谱-串联质谱在多反应检测(MRM)模式下测定。结果显示盐酸可乐定等5种Alpha受体激动剂标准曲线在0.5～100μg/L浓度范围内线性良好。线性相关系数(r)均大于0.99；在1～50μg/kg添加水平下,5种
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