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我国胃癌的发病率居高不下,患者多处于局部进展期和晚期且生存率较低,早期胃癌的表现与胃炎类似,其早期诊断和精准治疗都比较困难。胃癌的发生发展是一个多因素参与的复杂生物学过程,它发生、发展的病理变化往往造成机体基础代谢产生相应改变,进而引起小分子代谢物种类或浓度随着时间的变化而发生相应的变化,最终造成与正常个体之间代谢轮廓的差异。赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)是第一个被发现的组蛋白去甲基化酶,是细胞内控制很多生命过程的开关,与胃癌的发生、侵袭密切相关。胃癌的发生和转移往往伴随着LSD1的异常表达,基于此,本论文选用LSD1异常表达的胃癌细胞株MGC-803和正常表达的胃粘膜上皮细胞株GES-01作为研究对象,采用SDZ17对其进行干扰,运用动态代谢组学技术,对胃癌细胞的代谢通路进行分析;拟从分子水平上揭示LSD1在胃癌细胞代谢过程中的重要调控作用;通过统计学分析得到胃癌细胞的分子标志物,为胃癌的早期诊断、靶向药物精准治疗提供基础理论依据。一、论文实验内容主要完成以下部分:(1)采用MTT法测定LSD1抑制剂SDZ17对LSD1高表达的胃癌细胞MGC-803和胃粘膜上皮细胞GES-01增殖抑制作用的研究;(2)基于UPLC-QEMS测定细胞代谢物的方法学研究;(3)代谢组学技术研究SDZ17对LSD1高表达的胃癌细胞MGC-803和胃粘膜上皮细胞GES-01的代谢重编程作用。二、结果:(1)采用MTT法测定了SDZ17对处于对数期生长期的胃癌细胞MGC-803和胃粘膜上皮细胞GES-01的生长抑制率,半数抑制浓度分别为1.0μM和50.0μM;SDZ17对MGC-803的增殖抑制作用较GES-01强,且对两种细胞的抑制作用具有时间和浓度依赖性。(2)根据对细胞代谢物的提取率和稳定性优选了甲醇-水-氯仿(12:3:5,v/v/v)作为萃取剂系统;根据色谱柱压力,多针连续进样的稳定性以及QC样品的重现性优化了色谱条件,通道A(水)和通道B(乙腈)的梯度洗脱体系满足要求。方法学考察结果表明该方法操作简单,重现性好,通量高,能够高效稳定地萃取和保留细胞样品中的小分子代谢物,符合方法学的要求。(3)SDZ17对胃癌细胞MGC-803的代谢调控作用研究结果显示:SDZ17对LSD1高表达的胃癌细胞MGC-803的代谢通路具有较强的影响,可引起包括氨酰tRNA生物合成、精氨酸和脯氨酸代谢途径、氮平衡、缬氨酸,异亮氨酸和亮氨酸代谢在内的代谢通路的变化;SDZ17诱导胃癌细胞的发生代谢重编程,且具有时间和浓度依赖性。(4)SDZ17对正常胃粘膜上皮细胞GES-01的代谢调控作用研究的结果显示:SDZ17对正常胃粘膜上皮细胞GES-01的代谢通路的影响相对于胃癌细胞MGC-803的影响较小,且随着作用时间的延长,影响作用有趋于减弱的态势。三、结论:(1)LSD1抑制剂对LSD1高表达的胃癌细胞MGC-803的增殖具有抑制作用。(2)LSD1可能是诱导胃癌细胞MGC-803代谢重编程的重要因素之一。