目的构建金黄色葡萄球菌特异性表面的弹性纤维结合蛋白(Elastin Binding Proteins of S.aureus,EbpS)N端蛋白(nEBPS)基因序列的原核表达系统,制备其多克隆抗体。方法根据GeneBank里报道的nEBPS基因序列设计特异性引物,PCR方法特异性扩增nEBPS基因(nebps),分别构建克隆载体pMD19-T(+)/nebps和原核表达载体pQE30(+)/nebps,经PCR、双酶切和测序鉴定后,转化大肠杆菌表达宿主菌M15[pREP4],经1mM异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后表达,表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western Bloting,WB)分析鉴定,经镍螯合亲和层析胶体(Ni-NTA Agrose)纯化,再用SDS-PAGE和WB法鉴定。制备抗原,免疫新西兰兔子,得到抗血清并对抗血清进行鉴定。结果pQE30-nebps重组表达载体构建成功,SDS-PAGE结果显示融合蛋白在构建的原核表达系统中呈较高表达,约占全蛋白的40%左右,WB结果确定表达产物为nEBPS。经纯化,得到了纯度较高的nEBPS蛋白,制备抗原免疫新英格兰兔子后得到特异性较高的多克隆抗体,效价为256。结论通过基因重组技术,金黄色葡萄球菌的可溶性表面蛋白nEBPS在构建的原核表达系统M15[pREP4]中得以成功表达,并获得了高纯度的目的蛋白及特异性较高的多克隆抗体。为进一步制备单克隆抗体奠定了基础。