【摘 要】
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冰结构蛋白(Ice Structuring Proteins,ISP)基因,其编码的蛋白产物是一类能够非依数性降低溶液冰点而对熔点影响很小,在低温下保护生物体免受冻伤的损伤的蛋白质.本研究
【机 构】
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中国水产科学研究院长江水产研究所,湖北省武汉市东湖新技术开发区武大园一路8号,430223
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冰结构蛋白(Ice Structuring Proteins,ISP)基因,其编码的蛋白产物是一类能够非依数性降低溶液冰点而对熔点影响很小,在低温下保护生物体免受冻伤的损伤的蛋白质.本研究中,从罗非鱼中克隆得到了冰结构蛋白基因及其启动子区,其基因长度为4974bp,包含4个内含子,5个外显子,ORF长度为453bp,编码150个氨基酸,启动子区长度为2251bp.对该启动子进行了转录因子结合位点分析及进行了荧光素酶报告基因分析发现,其启动子启动活性较弱,并且主要集中在-500bp以前.另外,我们对罗非鱼进行了低温胁迫实验,首先在30℃水温下养殖2周,随后以1℃/d的降温速率将实验温度从30℃降至10℃.利用实时定量荧光PCR检测该基因在罗非鱼受低温胁迫时的表达情况,结果发现,其在肝脏,小肠中表达随温度降低而显著降低,而在脑,心脏,肌肉中表达升高,同时,Western Blot结果显示其只在肝脏中蛋白含量显著降低.另外,对该基因进行了原核表达,并利用差式扫描量热仪分析了原核表达产物,发现其降低了溶液冰点0.6℃.以上结果说明,罗非鱼冰结构蛋白基因同其他鱼类冰结构蛋白基因功能相似,受到低温胁迫时,在温水鱼罗非鱼中其作用受到限制.
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