【摘 要】
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从广东阳江某猪场死亡的仔猪肺及脑组织中分离到一株猪伪狂犬病毒(PRV).利用PRV国标引物对从组织病料中提取的核酸进行聚合酶链式反应(PCR),结果呈阳性;对病料处理后接种猕猴
【机 构】
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广东海大畜牧兽医研究院有限公司 广州511400
【出 处】
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第五届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会2014年学术年会、中国畜牧兽医学会生物制药学分会暨中国微生物学会兽医
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从广东阳江某猪场死亡的仔猪肺及脑组织中分离到一株猪伪狂犬病毒(PRV).利用PRV国标引物对从组织病料中提取的核酸进行聚合酶链式反应(PCR),结果呈阳性;对病料处理后接种猕猴肾细胞( VERO),可导致VERO细胞出现明显病变;半数细胞感染量(TCIDso)的测定得出结果显示,该病毒对VERO细胞的TCIDso_106.4/O.lniL;利用伪狂犬抗体阳性血清进行细胞免疫荧光(IF)分析结果显示,病毒可特异性结合PRV血清抗体.将该PRV接种新西兰兔,2448小时后,实验兔出现明显的神经症状,直至死亡.参考GeneBank中PRV gE和gB基因组序列设计引物,利用PCR法分别扩gE和gB基因片段,胶回收PCR产物,进行AT克隆后送测序公司进行测序,序列分析结果显示PRV gE基因的同源性同GeneBank中相关序列的同源性在gg％,对应氨基酸的同源性在gg％以上,说明PRV野毒在野外进化中对gE基因的进化压力不大;PRV gB基因的变异较为明显,本毒株与2012年以来分离PRV毒株的同源性较高,同PRVBarthaz株相比,在gB基因ORF 220-380区间的两个不同区域上分别缺失9个和12个核苷酸,生物信息学分析表明,这一缺失提高了毒株的抗原性,提示疫苗的使用可能增加了PRV gB基因的进化压力.结合以上分析,本文应用杆状病毒表达系统串联表达了PRV gE和gB基因的抗原区多肽.本文利用敏感细胞分离了一株PRV野毒,该该病毒对易感动物具有较强的致病作用,生物信息学分析为PRV毒力演变提供了有力线索;应用杆状病毒表达系统表达了PRV gE和gB基因的抗原区多肽,为进一步抗体免疫学分析奠定了基础.
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