抗CD20单克隆抗体可用于临床治疗非霍奇金淋巴瘤、类风湿性关节炎及系统性红斑狼疮等疾病。本研究根据人源化抗CD2O抗体cDNA序列,人工合成其抗体的轻链全长cDNA和重链全长cDNA,以轻链全长cDNA为模板扩增VL,以重链全长cDNA为模板分别扩增VH和CH3,再以VL、VH和CH3为模板,overlap PCR扩增minibody的cDNA,测序,分别构建了抗CD20minibody及轻链和重链的原核表达pET28a(+)载体。IPTG浓度诱导6h后,SDS-PAGE电泳结果显示minibody可以可溶形式和包涵体形式表达,而抗CD20抗体轻链和重链蛋白主要以包涵体形式表达。Western blotting分析表明以可溶形式和包涵体形式表达的minibody具有IgG(CH3)抗原性,抗CD20抗体轻链和重链蛋白也具有抗原性。诱导minibody表达,用His纯化柱纯化可溶蛋白。以纯化的minibody为一抗,HRP标记的兔抗人IgG为二抗,Western blotting鉴定Raji细胞中特异性CD20条带。本实验构建的抗CD20 minibody可以在原核细胞中高效表达。