【摘 要】
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目的：建立一种新型的人成纤维细胞原代培养、传代及鉴定的方法.方法：取24岁以下健康男性包皮,去除皮下结缔组织,采用0.5％中性蛋白酶(Dispase Ⅱ)4℃消化过夜,分离表皮与真皮
【出 处】
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全国第二十三届烧伤专业委员会学术会议
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目的：建立一种新型的人成纤维细胞原代培养、传代及鉴定的方法.方法：取24岁以下健康男性包皮,去除皮下结缔组织,采用0.5％中性蛋白酶(Dispase Ⅱ)4℃消化过夜,分离表皮与真皮组织,剪碎真皮组织,0.25％胰酶37℃消化15分钟.与传统培养方法直接将表皮与真皮组织剪碎0.25％胰酶37℃震荡消化1小时进行比较.台盼蓝染色后镜下观察两种方法细胞成活率、细胞形态及数量,第二天细胞贴壁数量及细胞传代时间.胰蛋白酶消化传代,应用免疫细胞化学方法及West bloting方法检测细胞中vimentin表达进行鉴定.结果：中性蛋白酶联合胰蛋白酶消化方法和传统胰蛋白酶消化方法均可成功培养人成纤维细胞,都表达vimentin.两者相比,新型中性蛋白酶联合胰蛋白酶消化方法细胞成活率可达90％以上,细胞数量多,纯度高,状态好,培养第二天80％以上细胞均长出明显形态,培养7天后可达80％融合率进行传代.传统胰蛋白酶消化方法细胞成活率70％,细胞数量少,状态较差,培养第二天仅有部分细胞贴壁,培养7天可出现散在克隆,培养14天可进行传代.结论：中性蛋白酶联合胰蛋白酶消化培养方法是一种更加优化的人成纤维细胞培养方法.
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