【摘 要】
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目的探讨Wnt通路新成员—DIXDC1对大肠癌细胞增殖的作用及其可能的机理及信号通路。方法脂质体介导的全长人DIXDC1基因转染大肠癌细胞株DLD1,G418筛选并建立稳定表达的克隆。
【机 构】
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上海市第六人民医院病理科; 复旦大学上海医学院病理学系;
【基金项目】
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国家自然科学基金(项目批准号30700363);上海市卫生局局级科研项目(项目编号2007087)
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目的探讨Wnt通路新成员—DIXDC1对大肠癌细胞增殖的作用及其可能的机理及信号通路。方法脂质体介导的全长人DIXDC1基因转染大肠癌细胞株DLD1,G418筛选并建立稳定表达的克隆。RNA干扰实验抑制DIXDC1表达。采用MTT法体外检测细胞增殖,流式细胞技术分析细胞周期分布及凋亡细胞比率;采用裸鼠移植瘤实验检测DIXDC1对肿瘤成瘤性的影响;免疫组织化学方法检测84例大肠癌组织中DIXDC1及Ki67蛋白表达;采用Western blot法检测细胞周期相关蛋白P21,cyclinD1,P27,P53及信号转导分子Akt,p-Akt蛋白表达。结果获得2个稳定转染且过表达DIXDC1的DLD1大肠癌细胞株。过表达DIXDC1的大肠癌细胞在裸鼠体内成瘤性增强。体外实验表明,DIXDC1过表达能通过G1-S期加速促进大肠癌细胞增殖。在84例人大肠癌组织中共有69例检测到DIXDC1蛋白阳性表达(82.1%),并且表达强度与Ki67阳性指数呈正相关(Kendal相关分析,P<0.05)。免疫印迹实验结果显示过表达DIXDC1能上调CvclinD1蛋白和下调P21蛋白表达。过表达DIXDC1的DLD1细胞p-Akt蛋白水平升高而总Akt水平不变。采用RNA干扰抑制DIXDC1表达或LY294002抑制PI3K信号通路均能够抑制大肠癌细胞增殖及降低G1-S细胞百分比,同时上调p21蛋白和下调CyclinD1蛋白表达。结论DIXDC1过表达能通过激活的PI3K信号通路促进大肠癌细胞的增殖。P21和CyclinD1是该过程中的两个靶基因。
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