目的:克氏原螯虾是重要的过敏食物之一,其引发过敏安全问题亟需改善,在克氏原螯虾中是否还存在新型过敏原、致敏性如何都有待进一步探究。本研究旨在分析鉴定克氏原螯虾中存在的新型过敏原。方法:以克氏原螯虾为实验对象,通过硫酸铵盐析和柱层析的方法,从肌浆中提取纯化目的蛋白,并对纯化的蛋白进行MALDI-TOF质谱鉴定。利用过敏患者血清,采用dot blot确认纯化蛋白的致敏性。通过SDS-PAGE、native-PAGE、Western blot、dot blot及抑制性ELISA等方法对过敏原的理化特性、消化稳定性进行分析。利用表面等离子共振技术检测蛋白间的相互作用,并结合噬菌体展示技术分析确定过敏原的抗原表位。结果:纯化的28 kDa蛋白经质谱鉴定为磷酸丙糖异构酶(triosephosphate isomerase,TIM),血清学鉴定能够与过敏患者血清IgE发生特异性结合。另一能够识别结合兔抗小龙虾TIM-IgG的90 kDa蛋白经纯化鉴定后确认为细丝蛋白C(filamin C,FLN c),该蛋白与TIM具有相似的理化特性、消化稳定性,并存在IgG/IgE交叉反应性。通过噬菌体展示技术确定了TIM具有5个构象表位和3个线性表位,FLN c具有9个构象表位和10个线性表位,比较分析二者的抗原表位后发现TIM和FLN c存在共同表位。结论:TIM和FLN c是克氏原螯虾的两个新型过敏原,二者所具有的共同表位导致了其相似的特性及交叉反应性。