【摘 要】
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目的 筛选结核分枝杆菌特异性血清标记物,并进行体外表达及纯化。方法 通过Western blot技术筛选具有免疫原性的结核分枝杆菌特异蛋白质,质谱鉴定获得相应基因信息,设计扩增目的基因引物,PCR扩增目标基因,构建pTrcHis2-TOPO-KatG重组质粒；IPTG诱导体外表达特异蛋白质；树脂吸附纯化表达的蛋白。结果 质谱鉴定共获80个具有免疫原性的结核分枝杆菌特异蛋白候选物,其中42个蛋白质功
【机 构】
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贵州省遵义医学院附属医院呼吸二科 呼吸医学研究室
【出 处】
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中华医学会结核病分会2013年学术大会
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目的 筛选结核分枝杆菌特异性血清标记物,并进行体外表达及纯化。方法 通过Western blot技术筛选具有免疫原性的结核分枝杆菌特异蛋白质,质谱鉴定获得相应基因信息,设计扩增目的基因引物,PCR扩增目标基因,构建pTrcHis2-TOPO-KatG重组质粒；IPTG诱导体外表达特异蛋白质；树脂吸附纯化表达的蛋白。结果 质谱鉴定共获80个具有免疫原性的结核分枝杆菌特异蛋白候选物,其中42个蛋白质功能较明确,包括katG,rpoB及rpoC等基因,另38个蛋白质目前未见相关功能报道。体外表达KatG蛋白,ProBand纯化获得单一的高表达KatG蛋白。结论 通过Western blot及质谱技术成功筛选及鉴定出结核分枝杆菌特异性蛋白质,体外成功表达和纯化结核分枝杆菌Kat-G特异性蛋白质。目前国内外尚未见相关报道。该方法的建立为结核病的快速诊断、新药研发及疫苗的研制奠定了基础。
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