【摘 要】
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Interleukin 10 (IL-10) is a pleiortropic cytokine which plays a pivotal role in the inflammatory response, immunological reaction and diseases development.RGD peptide has been demonstrated to bind to
【机 构】
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Department of Burns and Cutaneous Surgery,Xijing Hospital,The Fourth Military Medical University,17
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Interleukin 10 (IL-10) is a pleiortropic cytokine which plays a pivotal role in the inflammatory response, immunological reaction and diseases development.RGD peptide has been demonstrated to bind to neovasculature endothelial cells specifically.In our study,a novel hybrid protein combining hIL10 with RGD was designed.The DNA sequence encoding recombination fusion protein rhIL10-RGD was subcloned into the pET22b(+) vector for protein expression in E.coli strain BL21(DE3).SDS-PAGE analysis showed an induced expression product band, with a molecular weight of about 19.3kDa, which constituted 30% of the total bacterial protein.The recombinant protein was isolated and purified by Sephacryl S-300 column, and then renatured by dialysis against urea with step-down concentration.Cultured human dermal fibroblasts were treated with transforming growth factor β 1 (TGF-β 1) stimulation and rhIL10-RGD treatment.The protein levels of various fibrosis related molecules were assessed by western blot and immunocytochemistry.The results showed that IL10-RGD, similarly to IL-10, can significantly down-regulate the protein expression levels of Coll, Co13 and α-SMA, and decrease α-SMA positive cells in cultured dermal fibroblasts stimulation with TGF-β 1.More importantly, IL10-RGD can specifically bind to the neovasculature endothelial cells in hypetropic scar.These results indicate that rhIL10-RGD has the antifibrotic effect on dermal fibroblasts, the potential usage in fibrosis diseases by improvement the abnormal deposition of ECM, and suggest that rhIL10-RGD may be as a candidate for the treatment of skin fibrosis and pathological scars.
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