【摘 要】
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为了制备牛瑟氏泰勒虫病基因工程亚单位疫苗,根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因序列及黄牛IL-18基因序列,设计两对特异性引物,通过重组PCR技术将两段基因拼接后克隆到pMD-18-T载体,经过PCR、酶切和测序鉴定后,再亚克隆到pET-28a原核表,达载体,构建pET-28a-p23-IL-18重组原核表达载体,将鉴定正确的质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,在37℃用IPT
【机 构】
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延边大学农学院,吉林延吉,133002
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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为了制备牛瑟氏泰勒虫病基因工程亚单位疫苗,根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因序列及黄牛IL-18基因序列,设计两对特异性引物,通过重组PCR技术将两段基因拼接后克隆到pMD-18-T载体,经过PCR、酶切和测序鉴定后,再亚克隆到pET-28a原核表,达载体,构建pET-28a-p23-IL-18重组原核表达载体,将鉴定正确的质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,在37℃用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析.结果表明,成功构建牛瑟氏泰勒虫pET-28a-p23-IL-18原核表达载体,目的基因在大肠杆菌中成功获得表达,融合蛋白的分子量约为48ku,并被牛瑟氏泰勒虫阳性血清所识别.本研究结果为牛瑟氏泰勒虫病基因工程亚单位疫苗的制备奠定了基础.
其他文献
为探讨莫氏巴贝斯虫滑动体的结构组成,该研究拟克隆和表达滑动体的部分组件蛋白,并制备多克隆抗体,为研究巴贝斯虫滑动体的结构功能及作用机制奠定基础.因此本研究利用末端快速扩增技术从莫氏巴贝斯虫裂殖子cDNA中扩增gap45、gap50、myo A、actin、aldolase、trap及mic基因,将获得的全长或基因的部分序列构建pGEX:4T:1原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)pLys中用
本研究为了构建莫氏巴贝斯虫(Babesia motasi)裂殖子cDNA表达文库,从中筛选和鉴定功能基因,利用差速离心法从莫氏巴贝斯虫感染的红细胞中纯化裂殖子,提取总RNA并纯化mRNA.在合成的双链cDNA两端加上含EcoRⅠ和HindⅢ定向接头后连接到λSCREEN载体上.通过体外包装形成完整的噬菌体颗粒,并用之转染ER1647,构建莫氏巴贝斯虫裂殖子的cDNA表达文库.用莫氏巴贝斯虫阳性血清
本文利用建立的ELISA方法对采集自我国22个省44个县的3204份血清样品进行低致病力的莫氏巴贝斯虫感染小反刍动物的情况进行调查,结果显示,在被调查的所有省份都有该病的流行,且在各个省份之间血清阳性率有很大差异,如吉林阳性率最低(1.6％),内蒙阳性率最高(91％).其平均阳性率为43.5％(1393/3204),表明低致病性莫氏巴贝斯虫在我国普遍流行.本研究是首次对我国莫氏巴贝斯虫的血清流行状
本研究团队于2010年启动了应用Solexa方法测定羊莫氏巴贝斯虫和羊巴贝斯虫未定种新疆株的全基因组序列测定工作.然而由于数据的不完整性,获得的数据并不能完全组装成出基因组精确图谱.所本研究拟建立这两种巴贝斯虫的BAC文库,为构建其物理图谱和基因组精确图谱做前期的铺垫工作.通过体外培养羊巴贝斯虫未定种新疆株和莫氏巴贝斯虫临潭株单克隆虫株,并感染除脾绵羊,当染虫率达到15％后,收集血液,去除白细胞,
2001年用采自新疆牛羊体的血红扇头蜱和小亚璃眼蜱感染除脾绵羊时,分离获得一株巴贝斯虫,通过对其形态特征、致病性、传播媒介和18S rRNA与ITS基因序列比对分析等研究,初步确定其为一种新发现的羊巴贝斯虫,并将其暂命名为羊巴贝斯虫未定种新疆株.为了对该寄生虫进行深入研究,本研究应用感染的羊血,建立了该寄生虫持续体外培养系统.在24和6孔板中,以RPMI 1640培养液,添加20％的胎牛血清和7.
本研究以体外培养获得的裂殖子可溶性抗原建立了一种对本病原特异性的ELISA方法.通过应用371份阴性血清和112份阳性血清对该方法进行特异性和敏感性的评价结果显示,当阳性阈值确定为24.65％的抗体比率时,对应的特异性和敏感性为97.3％.同时,交叉反应实验结果显示,感染我国羊的其它主要梨形虫(莫氏巴贝斯虫、尤氏泰勒虫和吕氏泰勒虫)和羊无浆体的阳性血清与该可溶性抗原在western blot和EL
本研究应用体外培养单克隆的莫氏巴贝斯虫临潭株G7株,纯化获得裂殖子,提取/纯化RNA和mRNA,构建裂殖子cDNA表达文库.以感染后第6周的羊血清,用免疫学筛选技术,自该cDNA文库中筛选获得5个具有较高相似性的EST片段(297-357bp).然后应用5RACE扩增技术,扩增获得一个1140bp的基因,同源性分析表明,BQP35与牛巴贝斯虫的一个假定蛋白具有26％的相似性.结果显示,该蛋白是一个
本研究旨在测定新疆巴贝斯虫rap-1基因序列和分析其分子特征,研究结果显示新疆巴贝斯虫rap-1基因座由rap-1a基因组成,该基因序列分为明显的三个区域,位于5’和3’的两个保守区和中间的一个变异区.3’保守区分为两类基因序列,仅在7个核苷酸位点存在变异.新疆巴贝斯虫rap-1基因座因此包含多个rap-1a基因拷贝.变异区由一系列的36bp变异的重复基因序列组成.这些重复的变异序列特征在以前的绵
本研究测定了临潭株棒状体相关蛋白的多基因家族的基因序列及基因座结构.结果显示临潭株的棒状体相关蛋白(rap-1)基因座复杂的基因结构。1),存在三种rap-1基因类型(rap-1a,rap-1b and rap-1c);2),rap-1a和rap-1b包含多个基因拷贝；3),rap-1a基因存在基因多态性,包含两种rap-1a基因类型(命名为:rap-1a 61和rap-1a 67)同源性为95.
田鼠巴贝斯虫分泌抗原(BmSAl)是一个重要的诊断抗原候选分子,但全长蛋白的表达量少,也不宜纯化.本研究在此基础上,通过生物信息学分析,选取N末端信号肽后,C-末端跨膜区前,包含CPSF73:100_C功能区的228个氨基酸所编码基因片段,重组高效表达了一个可溶性截短型抗原,解决了完整蛋白重组表达纯化的困难.纯化的截短型抗原作为酶联免疫试验(ELISA)诊断抗原可清晰地区分阴性及阳性鼠血清,并与其