【摘 要】
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目的：研究转录因子AP-2α抑制胃癌细胞株BGC-823增殖及诱导凋亡的作用机制.方法：取临床胃癌及其癌旁组织30对,提取总蛋白及总RNA,免疫印迹及荧光定量法检测AP-2α及KLF4基因mRNA含量,并分析二者相关性;生物信息学预测AP-2α与KLF4基因启动子结合位点并通过荧光素酶报告基因法进行验证;转染pcDNA-AP-2α及pshRNA-KLF4到BGC-823细胞,转染后48h,确定细胞
【机 构】
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解放军南京总医院药品科,南京210002 解放军454医院药学部,南京210002
【出 处】
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2017年江苏省药学大会暨第十七届江苏省药师周
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目的：研究转录因子AP-2α抑制胃癌细胞株BGC-823增殖及诱导凋亡的作用机制.
方法：取临床胃癌及其癌旁组织30对,提取总蛋白及总RNA,免疫印迹及荧光定量法检测AP-2α及KLF4基因mRNA含量,并分析二者相关性;生物信息学预测AP-2α与KLF4基因启动子结合位点并通过荧光素酶报告基因法进行验证;转染pcDNA-AP-2α及pshRNA-KLF4到BGC-823细胞,转染后48h,确定细胞转染效率,后免疫印迹法检测胞内AP-2α,KLF4,P53及BCL-2蛋白表达;取转染后48h BGC-823细胞,MTT检测各组细胞对数期增殖活性,双染法检测细胞凋亡.
结果：实验所检测的30对组织标本中,与癌旁组织相比较,肿瘤中的AP-2α蛋白表达及KLF4基因mRNA含量均明显降低(P＜0.01,vs癌旁组),二者在肿瘤中的表达显著正相关;生物信息学分析结果显示,核转录因子AP-2α在KLF4基因启动子区域9个碱基的结合位点“5-GCCGCCGGC-3",位于转录起始位点前52碱基处,荧光素酶活性检测证实AP-2α可以通过结合位点结合于KLF4基因启动子区域并对基因的转录进行正向调控;细胞转染后48h,通过GFP计算分析细胞瞬时转染效率约为85％,蛋白含量检测数据表明,AP-2α过表达可以增强细胞内KLF4和P53蛋白表达,同时抑制胞内BCL-2蛋白表达,而KLF4基因沉默则能够明显减弱AP-2α对KLF4和P53蛋白表达的影响;细胞转染后24～72h,pcDNA-AP-2α转染能够明显抑制BGC-823细胞对数期增殖活性,pshRNA-KLF4转染则能够明显减弱pcDNA-AP-2α转染抑制细胞增殖活性的作用;凋亡检测结果显示,细胞转染后48小时,pcDNA-AP-2α转染能够明显诱导BGC-823细胞凋亡,pshRNA-KLF4转染则能够明显减弱pcDNA-AP-2α转染诱导细胞凋亡的能力.
结论：AP-2α通过促进KLF4基因的转录,进而上调下游蛋白P53、抑制BCL-2表达,抑制胃癌细胞株BGC-823细胞增殖并诱导凋亡.
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