【摘 要】
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采用RT-PCR方法从传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)中扩增RNA获得1176bp的核衣壳蛋白(N)基因,将其插入于pFB-LIC-Bse杆状病毒载体中,构建了重组质粒pFB-LIC-Bse-N,转化至感受态细胞DH10Bac中,获得重组杆粒rBacmid-N.再将其转染至Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒.IFA和Westernblot分析表明重组N蛋白可以被辣根过氧化物酶(HRP)标记的组氨
【机 构】
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甘肃农业大学动物医学院, 兰州 730070;北京市农林科学院畜牧兽医研究所,畜禽疫病防控技术北京市重点实验室,北京 100097
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十九次学术研讨会
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采用RT-PCR方法从传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)中扩增RNA获得1176bp的核衣壳蛋白(N)基因,将其插入于pFB-LIC-Bse杆状病毒载体中,构建了重组质粒pFB-LIC-Bse-N,转化至感受态细胞DH10Bac中,获得重组杆粒rBacmid-N.再将其转染至Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒.IFA和Westernblot分析表明重组N蛋白可以被辣根过氧化物酶(HRP)标记的组氨酸单抗(anti-His)识别,表明IHNV N基因在昆虫细胞Sf9中获得了正确表达.本试验扩增了IHNV全长N基因序列,并首次构建了杆状病毒表达系统,成功的表达了N蛋白,为IHNV N蛋白相关功能研究奠定物质基础.本研究所构建的重组杆状病毒可大量增殖，该表达系统既能保持原蛋白的结构和抗原特性，又能在Sf9细胞上获得大量核衣壳蛋白，为获得单体蛋白和单克隆抗体的制备做好准备，为进一步研究IHNV的感染机制和鲑、鳟鱼类的免疫机制以及鱼类传染性造血器官坏死病血清诊断试剂盒的研制奠定了基础。
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