【摘 要】
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糖多孢红霉菌次级代谢产物红霉素是一类具有广谱抗菌活性的大环内酯类抗生素.随着红霉素类药物市场需求量的增加,对红霉素高产菌株的选育也越为重要.由于在糖多孢红霉菌红霉
【机 构】
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安徽大学健康科学研究院生命科学学院,合肥230601
【出 处】
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中国遗传学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会
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糖多孢红霉菌次级代谢产物红霉素是一类具有广谱抗菌活性的大环内酯类抗生素.随着红霉素类药物市场需求量的增加,对红霉素高产菌株的选育也越为重要.由于在糖多孢红霉菌红霉素合成基因簇中没有发现调控基因,使得对红霉素生物合成的调控研究放缓.本研究通过DNA片段染色体同源重组技术,敲除了糖多孢红霉菌A226染色体上SACE_7301基因,构建了△SACE_7301突变体。通过初步分析△SACE_7301,A226,△bldD发酵液的抑菌活性,发现△SACE_7301发酵液的红霉素产量比A226明显降低,SACE_7301基因回补又基本恢复红霉素产量,表明SACE_7301基因可能是参与红霉素生物合成的调控基因。为了进一步研究SACE_7301对红霉素生物合成产量的影响,利用HPLC分析了△SACE_7301与A226发酵液红霉素A的产量,结果显示△SACE_7301比A226红霉素A的产量降低了34.5%,回复菌株△SACE_7301/pZMW7301红霉素产量回复到A226水平的84.2%(与空载质粒对照相比提高152.1%),证明△SACE_7301突变体中红霉素A产量的降低是由于SACE_7301基因的缺失引起的,SACS_7301基因对红霉素A产量起到正调控作用.为了探讨SACE_7301调控红霉素合成的分子机制,在大肠杆菌中表达纯化了His6-SACE_7301蛋白。将纯化His6-SACE_7301蛋白和红霉素合成启动子PeryAⅠ在体外进行凝胶电泳阻滞试验(EMSA),发现PeryAⅠ启动子能够与SACE_7301蛋白结合,说明SACE_7301调控因子可直接调控红霉素第一步合成。
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