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采用高效液相色谱法，建立了熊果苷及其中间产品五乙酰熊果苷和对苯二酚单乙酯中相关杂质的分离方法。利用液相色谱-质谱联用技术对主要杂质峰进行了结构确认。通过对熊果苷工业品中的对苯二酚，五乙酰熊果苷中的对苯二酚单乙酯、对苯二酚以及对苯二酚单乙酯中的对苯二酚的分别测定，考察了熊果苷生产过程中相关杂质的传递过程。在此基础上建立了熊果苷合成工艺中的高效液相色谱-质谱指纹图谱，该指纹图谱可对熊果苷的生产过程及杂质传递进行快捷、有效的控制。