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引言 2012年,本室从广西的商品肉鸭中检出一种新的微RNA病毒,暂称之为类鸭甲肝病毒(Aalivirus A,AalV-A).该病毒最显著的基因组结构特点是,其2A区编码6个2A蛋白基序,包括4个NPGP基序、1个AIG1域和1个Hbox/NC盒[1].根据这一特点,本研究建立了特异性RT-PCR,以期为开展该病毒的分子流行病学研究提供必要的技术手段.材料方法 针对2A6Hbox/NC保守基序设计反转录引物,以2A2NPGP和2A3NPGP保守基序为PCR引物结合区,用AalV-A GL/12株为参考毒株,建立RT-PCR方法.选择2个型鸭甲肝病毒、3个型鸭星状病毒、坦布苏病毒、番鸭呼肠孤病毒和新型番鸭呼肠孤病毒为对照,进行特异性试验.构建含目的基因的重组质粒,并在体外转录为RNA,以10倍系列稀释的RNA为模板,分别进行RT-PCR,以确定方法的敏感性.结果 经条件优化,建立了AalV-A的特异性RT-PCR.用该法进行检测,从AalV-AGL/12株中扩增出462bp的序列,经克隆测序,确定扩增产物为该病毒的2A基因,扩增对照病毒的结果均为阴性.敏感性试验结果表明,可检出的最低RNA浓度为10-6 ng/μL,约每微升1043个拷贝.讨论 AalV-A是新发现的病毒,迄今尚无该病毒的诊断和检测方法,对该病毒进行体外培养亦很困难[1].针对这一现状,本研究建立了特异性分子检测方法.选AalV-A的2A保守基序设计引物,符合该病毒的基因组结构特点,便于保证方法的特异性.敏感性试验结果证实,可以满足分子检测对敏感性的要求.结论 建立了AalV-A的RT-PCR,该法具有良好的特异性和敏感性.