【摘 要】
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抗生素的长期大量使用和滥用使动物抵抗力下降,药物残留增加,病菌耐药性增强,还会破坏生态环境,引发食品安全问题。侧孢短芽孢杆菌S62-9能产生多种代谢物,可替代传统抗生素,用作饲料添加剂。本课题优化侧孢短芽孢杆菌S62-9发酵工艺和菌剂制备工艺,制备高活力菌剂并初步研究在小鼠体内应用。确定侧孢短芽孢杆菌S62-9芽孢形成率测定方法为80℃水浴处理20 min,此时,菌体死亡率为99%。优化侧孢短芽孢
【基金项目】
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十二五国家科技支撑计划子课题； 河北省科技支撑项目；
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抗生素的长期大量使用和滥用使动物抵抗力下降,药物残留增加,病菌耐药性增强,还会破坏生态环境,引发食品安全问题。侧孢短芽孢杆菌S62-9能产生多种代谢物,可替代传统抗生素,用作饲料添加剂。本课题优化侧孢短芽孢杆菌S62-9发酵工艺和菌剂制备工艺,制备高活力菌剂并初步研究在小鼠体内应用。确定侧孢短芽孢杆菌S62-9芽孢形成率测定方法为80℃水浴处理20 min,此时,菌体死亡率为99%。优化侧孢短芽孢杆菌S62-9发酵培养基和发酵条件,将菌体量作为指标,获得侧孢短芽孢杆菌S62-9高产芽孢发酵工艺。侧孢短芽孢杆菌S62-9最适发酵培养基为3%葡萄糖、1%玉米浆粉、0.3%牛肉膏和0.045%氯化钙,最适发酵条件为初始p H 7.0,37℃,240 r/min,发酵48 h,平板涂布法测得菌体量为6.0×10~8 CFU/m L,芽孢形成率85%以上。优化侧孢短芽孢杆菌S62-9菌剂干燥条件,建立侧孢短芽孢杆菌S62-9高活力菌剂制备工艺。侧孢短芽孢杆菌S62-9最适干燥条件为10%玉米淀粉作为助干剂,真空冷冻干燥法,制备得到颗粒度好的白色粉末状菌剂,菌体量为2.0×1010 CFU/g,有良好的耐热性、人工胃液耐受性和贮藏稳定性,人工肠液耐受性差。研究侧孢短芽孢杆菌S62-9菌剂在小鼠体内应用效果。侧孢短芽孢杆菌S62-9芽孢菌剂在6.0×10~9 CFU/m L时引起小鼠腹泻,营养体菌剂无腹泻现象产生,两种菌剂6.0×10~6、6.0×10~7 CFU/m L时,小鼠生长性能较好,6.0×10~8、6.0×10~9 CFU/m L时,小鼠生长性能较差,对小鼠代谢机能和免疫无显著影响（P＞0.05）。侧孢短芽孢杆菌S62-9最高使用剂量为6.0×10~8 CFU/m L。采用16S r DNA高通量测序法分析侧孢短芽孢杆菌S62-9菌剂对小鼠肠道菌群的影响。侧孢短芽孢杆菌S62-9芽孢菌剂在6.0×10~9 CFU/m L时引起小鼠腹泻,营养体菌剂无腹泻现象产生,两种菌剂在6.0×10~6、6.0×10~7 CFU/m L和营养体菌剂在6.0×10~8CFU/m L时,小鼠肠道菌群中拟杆菌门/厚壁菌门增大,芽孢菌剂在6.0×10~8 CFU/m L和营养体菌剂在6.0×10~9 CFU/m L时效果差;两种菌剂均对小鼠代谢无显著影响（P＞0.05）,与生长性能和代谢机能结果一致。
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