【摘 要】
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目的:探讨促红细胞生成素对肾纤维化小鼠微血管损伤相关因子的影响,为临床治疗慢性肾病提供实验依据。方法:采用随机数字表法将90只SPF级C57BL/6雄性小鼠（体质量为20±2g）,分为假手术组（Sham）,单侧输尿管梗阻肾纤维化模型组（UUO）和EPO治疗组（EPO）,每组30只。Sham组仅游离不结扎输尿管,UUO组结扎并离断左侧输尿管建立肾纤维化模型,治疗组造模后每日腹腔注射EPO溶液（100
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目的:探讨促红细胞生成素对肾纤维化小鼠微血管损伤相关因子的影响,为临床治疗慢性肾病提供实验依据。方法:采用随机数字表法将90只SPF级C57BL/6雄性小鼠（体质量为20±2g）,分为假手术组（Sham）,单侧输尿管梗阻肾纤维化模型组（UUO）和EPO治疗组（EPO）,每组30只。Sham组仅游离不结扎输尿管,UUO组结扎并离断左侧输尿管建立肾纤维化模型,治疗组造模后每日腹腔注射EPO溶液（1000IU/kg.d）。在术后第3、7和14天每组分别随机处死10只小鼠,取眼球血2ml,采用二乙酰肟比色法检测血清BUN含量,肌氨酸氧化酶法检测血清Scr含量,酶联免疫吸附法检测血清Cys-C含量;取梗阻肾组织,常规固定、石蜡包埋,切片行HE和Masson染色法观察肾组织纤维化及微血管损伤程度;利用Western Blot方法检测肾组织中微血管损伤相关因子HIF-1α、VEGF-A、TSP-1和肾纤维化相关因子TGF-β1、CTGF及ERK蛋白和ERK磷酸化表达水平。结果:1.病理学检查结果大体观察:Sham组小鼠两侧肾无明显不同。UUO组小鼠左侧肾随着梗阻时间延长,颜色变白,体积变大,肾盂水肿,实质变薄。EPO治疗后损伤情况减轻。镜下观察:与Sham组比较,UUO组明显发生肾纤维化及微血管损伤。随着EPO治疗时间的延长,肾小管扩张程度,炎症细胞浸润、间质胶原纤维堆积及微血管损伤情况有明显减轻。2.肾功能检测结果与Sham组比较,UUO组BUN、Scr、Cys-C含量逐渐升高（P＜0.05）,EPO治疗后各项指标降低（P＜0.05）。第3天时UUO组Scr、Cys-C高于Sham组（P＜0.05）,EPO治疗后Cys-C含量下降（P＜0.05）,Scr值变化不明显（P＞0.05）;第7天和14天时UUO组各项指标显著高于Sham组（P＜0.01）,EPO治疗后各指标显著下降（P＜0.01）。3.Western Blot检测结果肾纤维化相关因子:UUO组TGF-β1、p-ERK1/2/ERK1/2及CTGF蛋白表达水平均高于同时间点的Sham组（P＜0.05）。EPO治疗后下调不同时间点TGF-β1蛋白表达（P＜0.05）,在第7天和14天时明显下调p-ERK1/2/ERK1/2及CTGF蛋白表达（P＜0.01）。微血管损伤相关因子:UUO组HIF-1α蛋白表达在第7天和14天时高于Sham组（P＜0.05）,TSP-1蛋白表达在不同时间点均高于Sham组（P＜0.05）,而VEGF-A蛋白表达在各时间点明显低于Sham组（P＜0.01）。EPO治疗7天和14天时下调HIF-1α和TSP-1蛋白表达（P＜0.05）,并上调不同时间点VEGF-A蛋白表达（P＜0.05）。结论:1.EPO明显减轻UUO模型小鼠肾功能损伤。2.EPO通过TGF-β1/ERK信号通路,调节CTGF活性延缓肾间质纤维化进展。3.EPO可能通过HIF-1α/VEGF-A信号通路,调节TSP-1活性减轻UUO模型小鼠微血管损伤。
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