蜻蜓凤梨AfPIF4基因的克隆与功能鉴定

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蜻蜓凤梨(Aechmea fasciata)隶属凤梨科,为多年生草本单子叶植物,具有非常高的观赏价值,深受人们的喜爱。但是由于其营养生长期较长,所以人们一直通过控制栽培环境的温度、光照时间和使用乙烯等激素条件调控其开花时间以满足市场的需求,但截至目前,蜻蜓凤梨的开花机理尚不清楚,导致人工催花效果不十分理想。为了解析蜻蜓凤梨开花机理,本研究根据转录组中的片段信息,利用cDNA 快速末端扩增(Rapid amplification of cDNA end,RACE)的技术从蜻蜓凤梨中获得一个光敏色素因子(PIFs)的cDNA全长序列,并将其命名为AfPIF4。AfPIF4基因cDNA全长1 343 bp,开放阅读框为1296 bp,编码431个氨基酸。利用NCBI分析氨基酸序列结果显示:AfPIF4含有bHLH蛋白家族共有的功能结构域bHLH,与海枣(Phoenix dactylifera),大豆(Glycine max),玉米(Zea mays),番茄(Solanum lycopersicum)中的 PIF 同源性分别为52%,49%,42%,39%。进化树分析显示AfPIF4与小果野芭蕉的PIF5L(XP009407082.1)亲缘关系比较近。酵母单杂交技术证明AfPIF4具有转录激活功能。实时荧光定量PCR表明:AfPIF4在蜻蜓凤梨成株和幼株中的各个部位的表达量不同,说明AfPIF4的表达具有组织特异性,这为进一步研究AfPIF4的功能以及深入探讨蜻蜓凤梨开花机理提供了一定的理论依据。根据AfPIF4的CDS序列构建了CaMV35S::AfPIF 过表达载体,通过农杆菌介导侵染拟南芥花序法转化拟南芥植株,利用逆转录PCR(Reverse transcriptativePCR,RT-PCR)技术鉴定转拟南芥阳性植株,实验结果显示35S::AfIF4拟南芥阳性植株出现早花表型。该研究初步验证了AfPIF 的功能,表明蜻蜓凤梨AfPIF4可能具有促进开花的功能,为探究凤梨科植物开花机理奠定了基础。
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