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研究目的:通过动物实验及体外抗病毒实验,观察鼻嗅御感方对FM1-6-E2流感病毒的防护作用,并通过检测其对流感模型小鼠全身免疫及局部黏膜免疫功能的影响,探讨其防治流感的可能作用机制,以期为临床流感防控提供一种便捷、有效的药物,并阐释其部分科学原理。研究方法:(1)鼻嗅御感方体外抗FM1-6-E2流感病毒效果观察:分别将狗肾传代细胞(Madin-Daby canine kidney cells,MDCK)进行先给药后感染处理及药物病毒混合后再感染处理,通过CCK-8法检测细胞增殖情况,观察鼻嗅御感方对流感病毒的预防作用及直接灭活作用。(2)鼻嗅御感方体内防治流感效果观察:将BABL/c小鼠随机分为5组,即空白对照组、模型组、中药低剂量组、中药高剂量组及金刚烷胺组。各组小鼠连续给药/生理盐水7d,第8天,除空白对照组外全部小鼠滴鼻感染FM1-6-E2流感病毒液,造模2h后,各组小鼠继续给药/生理盐水7d。观察小鼠染毒后的行为改变,观察并记录各组小鼠染毒后7d的体重情况,染毒后10d的生存情况。计算各组小鼠染毒7d后的体质量变化,染毒10d后的死亡率、死亡保护率及中位生存时间。(3)鼻嗅御感方对流感模型小鼠免疫功能的影响:将BABL/c小鼠随机分为5组(分组、用药及造模方法同前)。分别于病毒感染前及染毒3d、7d后取血,流式法检测血清CD3、CD4、CD8含量及NK细胞杀伤活性,ELISA法检测血清分泌型免疫球蛋白A(secretory immunoglobulin A,SIg-A)、γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)含量;颈椎脱臼法处死小鼠,称重测定肺指数、脾指数及胸腺指数,流式法检测脾组织CD3、CD4、CD8含量及NK细胞杀伤活性;收集呼吸道分泌物,ELISA法检测SIg-A含量。结果:(1)鼻嗅御感方体外抗FM1-6-E2流感病毒效果观察:与模型组比较,8%浓度鼻嗅御感中药挥发油预防给药,可以明显提高病毒液攻击下MDCK细胞的OD值(P<0.001),1%、2%、4%浓度中药挥发油及阳性对照药物金刚烷胺的作用并不明显;与模型组比较,鼻嗅御感中药挥发油及金刚烷胺与病毒液混合后再攻击MDCK细胞,均能显著提高病毒抑制率(P<0.001)。(2)鼻嗅御感方体内防治流感效果观察:小鼠于病毒感染2d后陆续发病,与模型组比较,高剂量鼻嗅御感方及金刚烷胺均能改善流感模型小鼠的精神、行为、饮食及体质量降低情况(P<0.001,P=0.001);鼻嗅御感方能显著降低染毒小鼠的死亡率,延长中位生存时间(P=0.006)。(3)鼻嗅御感方对流感模型小鼠免疫功能的影响:预防给药7d后,与模型组比较,中药高剂量组及金刚烷胺组小鼠胸腺指数明显提高;小鼠血清NK细胞杀伤活性明显增强,血清CD3、SIg-A及INF-γ含量均显著升高;小鼠脾组织NK细胞杀伤活性、CD3含量、CD4/CD8比值均显著升高;小鼠呼吸道SIg-A分泌显著升高。病毒感染3d、7d后,与模型组比较,中药高剂量组及金刚烷胺组小鼠肺指数降低,胸腺指数升高;小鼠血清NK细胞杀伤活性明显增强,血清CD3、SIg-A及INF-γ含量均显著升高;小鼠脾组织NK细胞杀伤活性、CD3含量、CD4/CD8比值均显著升高;小鼠呼吸道SIg-A分泌显著升高。中药高剂量给药对上述指标的改善效果与金刚烷胺比较,差异有统计学意义。结论:鼻嗅御感方对FM1-6-E2流感病毒具有防护作用,其作用机制与直接杀灭病毒、提高机体的全身免疫及局部黏膜免疫功能密切相关。