论文部分内容阅读
本研究选取具有一定的地理代表性、观赏价值极高的名贵茶花品种为试材，摸索适合茶花基因组DNA的提取方法，筛选用于种质鉴定的合适引物并构建指纹图谱，同时进行种质资源遗传多态性、亲缘关系的分析，探讨了RAPD用于茶花品种资源分析的可行性，获得了以下结果： 1．采用改进的CTAB法抽提茶花基因组DNA，研磨时加入了适量PVP粉末，在2％的CTAB抽提液中临时加入了1％β-巯基乙醇，以防止了酚氧化成醌，避免了褐变；用CTAB/NaCl溶液去除多糖等措施，经A260和A280比值的测定，以及电泳检测和PCR扩增，结果表明改进的CTAB法所提取的DNA无论在纯度上还是在在完整性上都比其它方法要好。 2．用正交设计法建立了茶花RAPD-PCR扩增体系：反应总体积25μl，模板DNA80ng，10碱基随机引物的浓度为0.3μmol/L，dNTPs的浓度为0.2 mmol/L，MgCl2的浓度为2mmol/L，Taq-DNA聚合酶1U。PCR扩增程序为：94℃预变性5 min，94℃变性50s，36℃退火50s，72℃延伸90s，共40个循环，最后72℃延伸8min。 3．从100个随机引物中筛选出的20个有效引物共产生136条DNA片段，大小分布在0.25～2.0Kb之间，遗传多态性带120条占总数88.2％，每个引物扩增的DNA带数平均为6.8条。23个茶花品种的遗传相似性分析表明，各基因型间的Nei氏相似系数分布在0.4386～0.8936之间，平均相似性系数为0.7668。 4．通过非加权算术平均数聚类（UPGMA）法，绘制了23个茶花品种的遗传关系树状图。当以相似系数0.75为分割线时，23个品种可划分为4个类群。类群A为‘白尼姑’、‘花展时节’、‘波谱’；类群B为‘拉拉罗克’、‘香神’、‘南斑柯’、‘南极星’、‘樱桃节’、‘红台阁’、‘烈香’、‘凡丽’、‘贞洁’、‘惠勒’、‘红绒贝蒂’、‘达婷’、‘高帽子’、‘塔莉尔小姐’、‘复色明天’、‘秋牡丹’、‘魔术城’、‘凯蒂’；类群C为‘哈罗德’；类群D为‘春节’。RAPD分析结果与传统分类学结果基本相符。 5．用引物SBS-X5，SBS-X6和SBS-S15扩增的12条多态性条带构建了23个茶花品种的DNA指纹图谱，可用于茶花的种质鉴定。 6．实验发现，茶花株型紧凑这一性状可能与RAPD特异标记SBS-S15-1000片段上的某些基因连锁。