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贝氏柯克斯体是一种专性细胞内寄生菌，为重要人畜共患病Q热的病原体，也是一种重要的生物战剂和生物恐怖剂。Q热疫苗接种是预防贝氏柯克斯体感染的最有效的措施。采用基因工程技术制备重组保护性抗原是研制Q热分子疫苗的重要手段。贝氏柯克斯体的外膜蛋白P1(分子量为29kDa)、Com1(分子量为27kDa)以及34kDa蛋白(SP34)是重要的保护性抗原，热休克蛋白B(HspB)也是其主要表面抗原。另外许多研究证明热休克蛋白具有的佐剂样功能，能增强其它抗原的免疫保护效能。因此，本研究研制了贝氏柯克斯体HspB融合于P1、Com1、SP34外膜蛋白，制备了热休克蛋白融合蛋白，并对这些融合蛋白的免疫原性和免疫保护性进行评价。采用分子克隆技术，从贝氏柯克斯体基因组中克隆P1、Com1、SP34外膜蛋白基因以及HspB基因；将外膜蛋白基因分别与HspB基因融合构建了pQE30／p1-htpB、pQE30／com1-htpB、pET28a／htpB-sp34原核表达质粒，原核表达质粒转化的大肠杆菌分别产生P1-HspB、Com1-HspB、HspB-SP34融合蛋白。免疫印迹分析显示这些融合蛋白均可以与贝氏柯克斯体感染血清发生特异性的反应，证明其具有良好的抗原反应性。采用亲和层析的方法纯化P1-HspB、Com1-HspB、HspB-SP34融合蛋白，用它们分别免疫BALB／c小鼠，分析其免疫原性。P1-HspB融合蛋白免疫小鼠不仅产生特异性IgG抗体的水平显著高于单P1蛋白免疫小鼠，而且γ干扰素和IL-2细胞因子水平也显著高于P1单个蛋白免疫。检测Com1-HspB和HspB-SP34融合蛋白免疫小鼠后的抗体水平，结果同样表明融合蛋白诱导机体产生特异性抗体的能力显著好于外膜蛋白单独免疫。将纯化的P1-HspB、Com1-HspB、HspB-SP34融合蛋白分别免疫BALB／c小鼠，用贝氏柯克斯体毒株对免疫小鼠进行攻击，最后用定量PCR分析受攻击小鼠脾脏的贝氏柯克斯体载量。多次试验的结果显示融合蛋白免疫小鼠的贝氏柯克斯体攻击后脾脏荷菌量显著低于单独外膜蛋白免疫小鼠，说明热休克融合蛋白P1-HspB、Com1-HspB、HspB-SP34的免疫保护效果明显好于P1、Com1、SP34、HspB单独免疫。结论：贝氏柯克斯体膜表面蛋白与热休克蛋白B融合后产生的P1-HspB、Com1-HspB、HspB-SP34融合蛋白的免疫原性和免疫保护性显著强于单个外膜蛋白，说明热休克蛋白B具有显著的免疫增强作用。P1-HspB、Com1-HspB、HspB-SP34融合蛋白可作为研制Q热分子疫苗的候选分子。