乳酸菌可以在动物体内进行定植并且具有突出的生理功能作用,对胃肠道正常菌群的改善,提高畜禽饲料的转化率,继而增加肉料比。我国是肉类食品的消费大国,在畜禽日常饲料中添加乳酸菌制剂对改善畜禽肉类的品质、减少抗生素的使用、保障人们健康具有重要意义。质粒稳定性在微生物遗传工程研究和生产中占有十分重要的地位,只有构建稳定的LAB载体才能达到LAB疫苗面市的目的。目前,已经有许多的乳杆菌质粒已被测序、并用于构建质粒载体。乳酸杆菌质粒复制方式为滚环复制（rolling-circle,RC）和theta（简称θ）复制,通常较小的质粒（﹤12 kb）通过滚环方式进行复制。通过对乳酸菌质粒的测序、分析,获得乳酸菌质粒的复制子和稳定基因是构建LAB稳定型质粒载体的关键。乳酸菌天然质粒的分离及功能分析的研究国内开展的较少,导致利用基因工程手段对乳酸乳杆菌的改良受到严重限制。本研究通过从优良植物乳杆菌中分离出质粒,基于该质粒序列结构,构建大肠杆菌-乳酸菌穿梭质粒,继而构建稳定型乳酸菌表达载体,为乳酸菌口服疫苗研究奠定基础。本研究主要内容及结果如下:1.本研究通过常规的乳酸菌分离方法:样品的稀释,37℃菌液初步培养;菌株划线分离;菌株增菌培养、镜检;生理生化试验;细菌16Sr DNA的鉴定等,从酸菜分离出一株植物乳杆菌LP3,且对大肠杆菌的抑菌圈达到21.48 mm。2.本研究对从酸菜中分离的植物乳杆菌LP3中的内源性质粒p LP3进行全序列测定及功能分析,通过质粒p LP3复制子,与p CPSP载体的氯霉素基因Cm R、p UC19的复制子构建大肠杆菌-乳酸菌穿梭质粒。并研究穿梭质粒的宿主范围、转化率和稳定性。实验结果:p LP3质粒大小为2017 bp,GC含量为37.48%。基于质粒p LP3,构建了大肠杆菌-乳酸菌穿梭质粒D-p LP3,并成功转化至乳酸乳球菌和乳酸乳酸杆菌,转化效率介于0.3×102～1.0×103 cfu/μg DNA之间。穿梭质粒经过60代连续传代培养后在植物乳杆菌内丢失率为30%左右,具有较高的质粒遗传稳定性特性。在穿梭质粒D-p LP3的基础上加上嗜酸乳杆菌的启动子Pslp A和信号肽以及e GFP目的蛋白,进一步构建乳酸菌表达载体D-p LP3-Pslp A-e GFP,并用其转化至植物乳杆菌并成功表达e GFP的绿色荧光。3.PCV2的Cap蛋白具有较好的免疫原性,能刺激机体产生抗PCV2的特异性抗体,若以猪肠道内的正常定植的植物乳杆菌为表达宿主表达PCV2的Cap蛋白,并将其应用到临床上,可能对圆环病毒感染的预防和控制具有重大意义。为检测嗜酸乳杆菌Pslp A启动子在植物乳杆菌中表达异源蛋白的能力,同时应对在养殖事业中猪因PCV2感染所导致的疾病,本研究利用重组植物乳杆菌D-p LP3-Pslp A-Cap制成口服疫苗,为基因工程生产安全、便利的生物制品开辟新途路。以（PCV2-CAP）ELISA特异性检测试剂盒检测表达载体的表达异源蛋白的能力。实验结果:乳酸菌表达载体D-p LP3-Pslp A-e GFP转化至植物乳杆菌,成功获得了荧光蛋白的表达。PCV2-CAP蛋白ELISA检测,表达量为30 ng/m L,D-p LP3-Pslp A载体具有分泌表达能力。