目的:掌握应用胶原酶溶液作肝脏原位循环、分离、纯化肝细胞的技术;研究细胞毒性淋巴细胞相关抗原4 融合蛋白(CTLA4-Ig)对同种肝细胞移植大鼠T 细胞亚群的影响,探讨CTLA4-Ig 在肝细胞移植中免疫抑制作用的可能机制。方法:建立大鼠急性药物性肝衰竭模型:10%D-氨基半乳糖(D-gal)溶液按1.0g/kg 一次性腹腔注射;肝细胞的分离和纯化:采用肝脏原位灌注法,制备成肝细胞悬液,肝细胞浓度为4×10~7 个/ml,于2 小时内经脾脏移植;动物分组:经脾脏肝细胞移植的大鼠3 小时后随机分为两组。Ⅰ组为实验组,移植术后24 小时行腹腔一次性注射CTLA4-Ig100μg/只,Ⅱ组为对照组,不予处理。观测术后鼠的肝脏功能、脾脏病理组织变化;用免疫组化法测大鼠外周血T 细胞亚群。结果:肝功能变化:实验组谷丙转氨酶(ALT)、血清总胆红素(TBil)低于对照组,差异有统计学意义,P<0.01。脾脏病理组织变化:实验组术后7 天脾内仍可见散在的多角型细胞或成细胞团,胞核核仁明显,但也可见已变形核固缩的肝细胞,对照组却很难见到形态典型的肝细胞,有大量的淋巴细胞浸润。外周血T 细胞亚群测定:实验组外周血T 淋巴细胞比对照组低,P<0.01,且主要是CD4~+T 细胞降低,对CD8~+T 细胞两组差别无统计学意义,CD4~+ /CD8~+T 细胞比值实验组较对照组降低,两组差别有统计学意义,P<0.05。结论:用上述方法分离的肝细胞活率较高,达95﹪以上。CTLA4-Ig 对大鼠肝细胞移植的急性排斥反应具有一定的抑制作用。CTLA4-Ig 在大鼠肝细胞移植中的免疫抑制作用可能是抑制T 淋巴细胞亚群,且主要是抑制CD4+T细胞,使CD4+ /CD8+T 细胞比值下降。