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诺卡氏菌（Nocardia,N.）革兰染色阳性、需氧、广泛存在于自然界中,如水、土壤等,是.种呈全球分布的机会致病菌,通常感染免疫力缺陷、器官移植、糖尿病、肿瘤以及长期服用类固醇激素的病人,主要引起肺部感染,也可通过血行播散等方式感染其他部位,如皮肤、中枢神经系统等。近儿年诺卡菌感染率不断升高,目前已知对人致病的诺卡菌约有25种,其中主要有巴西诺卡菌、星形诺卡菌、鼻疽诺卡菌、新星诺卡菌等。巴西诺卡菌一般通过外伤进入皮肤引起慢性炎症而形成脓肿等疾病,在西方国家主要引起足菌肿,也可通过吸入而引起感染。巴西诺卡菌过氧化氢酶（P61）由03I001640基因编码,是一种重要的毒力因子,在巴西诺卡菌感染中起着重要作用,是主要的免疫显性蛋白,能够刺激机体产生特异性的抗体,在临床诊断中具有潜在的价值。本研究通过制备巴西诺卡菌P61蛋白的单克隆抗体,并通过单克隆抗体筛选的方法筛选并鉴定P61蛋白的B细胞抗原表位,为巴西诺卡菌临床诊断与检测提供实验基础,为巴西诺卡菌致病机制提供实验依据。本文首先用处于对数生长期的巴西诺卡菌感染BALB/c小鼠足垫,构建足菌肿感染模型,以获取多克隆抗血清。在NCBI数据库中查找P61蛋白的编码基因（03I001640）,应用生物信息学方法进行密码子优化,然后通过基因合成的方法合成P61全长基因。将P61基因异入pET30a（+）质粒中,应用大肠杆菌BL21（DE3）进行IPTG诱导表达,His标签纯化试剂盒进行纯化后,应用PAGE和Western Blot对蛋白进行验证分析,将验证后的蛋白P61做为抗原免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体。通过截短表达的方法将P61全长基因进行截短表达,应用肽扫描方法,用制备的单克隆抗体对截短表达的蛋白通过Western Blot方法进行筛选鉴定。最后通过生物信息分析软件对P61蛋白的结构进行预测分析,并将筛选出的抗原表位在P61蛋白上进行定位分析。本文首次通过原核系统表达方法重组表达了具有生物学活性的P61蛋白,且纯化后纯度较高。纯化后的蛋白能被抗巴西诺卡菌小鼠血清特异性的识别。应用纯化的蛋白免疫小鼠获得了10株杂交瘤细胞株,10株杂交瘤细胞产生的单克隆抗体均能识别P61蛋白,而并不能识别his标签。通过肽扫描方法成功筛选到1个抗原表位和两个抗原表位区域。通过生物信息学软件对筛选到的抗原表位在预测的蛋白三维结构上进行定位,发现三个抗原表位均在蛋白表面。