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目的:研究apocynin(APO)对氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)/葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的结肠癌(colorectal cancer,CRC)小鼠温热治疗(hyperthermia,HT)的影响并初步探讨其作用机制。方法:1.实验分组及小鼠CRC实验动物模型的构建:60只4-6周龄的雄性balb/c小鼠,适应性喂养1周后,随机分为四组(对照组、AOM/DSS组、AOM/DSS+HT组、AOM/DSS+HT+APO组),每组15只。对照组小鼠实验开始前1天给予单次腹腔注射0.9%无菌生理盐水,不作其他处理,全程饮用新鲜水至实验结束。AOM/DSS组实验开始前1天单次腹腔注射10mg/kg的AOM溶液,第8天给予2%DSS溶液饮用连续7天,更换成新鲜饮用水喂养14天,再重复DSS/新鲜饮用水2个循环。AOM/DSS+HT组,在第一个循环后应用加热装置对小鼠腹部持续加热1h(38℃-40℃)。AOM/DSS+HT+APO组,在第一个循环后应用加热装置的同时,每天固定时间给予腹腔注射30mg/kg的APO溶液。2.实验过程及观测指标:实验开始第1天分别记录四组小鼠每只的初始体重,实验过程中分别观察并记录各组小鼠第7、14、21、28、35、42、49、56、63、70天的体重,实验期间每组小鼠存活只数、一般情况、精神状态以及排便情况。70天后结束实验,进行体重、结肠长度测量,采用HE染色进行组织学评估,Real time PCR法检测i NOS、COX-2基因表达,Western blot法检测i NOS、COX-2蛋白表达,免疫荧光技术检测肿瘤组织CD31表达,DHE染色检测活性氧(ROS)的生成,分光光度法检测NADPH氧化酶(NOX)活性、免疫组化观察P38MAPK、p-P38MAPK表达的变化。结果:1.各组小鼠的体重变化:实验结束后,与对照组平均体重相比,AOM/DSS组平均体重明显减轻(P<0.01),与AOM/DSS组平均体重相比,AOM/DSS+HT组和AOM/DSS+HT+APO组平均体重均有所增加(P<0.05或P<0.01),与AOM/DSS+HT组平均体重相比,AOM/DSS+HT+APO组平均体重进一步增加(P<0.05)。2.各组小鼠生存情况、结肠长度变化:对照组生存率为100%,AOM/DSS组、AOM/DSS+HT组、AOM/DSS+HT+APO组生存率分别为66.67%、80%、86.67%,治疗组生存率依次增加。与对照组相比,AOM/DSS组结肠长度明显缩短(P<0.01),与AOM/DSS组相比,经治疗后,AOM/DSS+HT组结肠长度增加,但无统计学意义(P>0.05),AOM/DSS+HT+APO组结肠长度增加,且具有显著差异(P<0.01)。与AOM/DSS+HT组相比,AOM/DSS+HT+APO组结肠长度进一步增加(P<0.05)。3.结肠HE染色显示:与对照组相比,AOM/DSS组小鼠结肠黏膜结构被破坏,上皮细胞大量缺失,腺体出现筛状结构且腺体增厚,无隐窝结构,无杯状细胞,大量炎性细胞浸润。AOM/DSS+HT组小鼠结肠黏膜结构部分完整,腺体大小和形状不规则,排列紊乱,隐窝结构异常、少量杯状细胞,部分炎性细胞浸润。AOM/DSS+HT+APO组小鼠结肠粘膜结构趋于正常,腺体结构恢复,增生较多,隐窝结构基本正常,含部分杯状细胞,少量炎症细胞浸润。4.结肠组织i NOS、COX-2m RNA表达水平:与对照组相比,AOM/DSS组i NOS、COX-2m RNA表达均明显升高(P<0.01)。与AOM/DSS组相比,AOM/DSS+HT组治疗后,i NOS、COX-2m RNA表达有不同程度的下降(P<0.01或P<0.05),AOM/DSS+HT+APO组治疗后,i NOS、COX-2m RNA表达明显下降(P<0.01)。AOM/DSS+HT+APO组与AOM/DSS+HT组比较,i NOSm RNA表达有下降趋势,但无统计学意义(P>0.05),COX-2m RNA表达进一步下降,且具有统计学差异(P<0.01)。5.结肠组织i NOS、COX-2蛋白表达水平:与对照组相比,AOM/DSS组i NOS、COX-2蛋白水平显著升高(P<0.01)。与AOM/DSS组相比,AOM/DSS+HT组治疗后,i NOS、COX-2蛋白水平有不同程度的下降(P<0.05或P<0.01),AOM/DSS+HT+APO组治疗后,i NOS、COX-2蛋白水平明显下降(P<0.01)。AOM/DSS+HT+APO组与AOM/DSS+HT组比较,i NOS蛋白水平有所下降,但无统计学意义(P>0.05),COX-2蛋白水平进一步下降,具有统计学意义(P<0.05)。6.免疫荧光检测肿瘤组织CD31表达:与对照组相比,AOM/DSS组CD31阳性表达的血管内皮细胞明显增加,MVD值升高,说明CRC小鼠的肿瘤微血管数量增多(P<0.01)。与AOM/DSS组相比,经治疗后,AOM/DSS+HT组和AOM/DSS+HT+APO组CD31阳性血管内皮细胞减少,MVD值降低,说明CRC小鼠的肿瘤微血管数量减少(P<0.05或P<0.01)。AOM/DSS+HT+APO组与AOM/DSS+HT组比较,CD31阳性血管内皮细胞进一步减少,MVD值降低,说明CRC小鼠的肿瘤微血管的生成更少(P<0.05)。7.ROS的生成:与对照组相比,AOM/DSS组荧光强度明显增强,说明结肠组织ROS水平较高(P<0.01),与AOM/DSS组相比,经治疗后,AOM/DSS+HT组和AOM/DSS+HT+APO组荧光强度有不同程度减弱,说明ROS水平下降(P<0.01),与AOM/DSS+HT组相比,AOM/DSS+HT+APO组结肠组织的荧光强度进一步减弱,说明ROS水平也进一步下降(P<0.05)。8.NOX活性:与对照组相比,AOM/DSS组NOX活性明显升高,具有显著差异(P<0.01),与AOM/DSS组比较,AOM/DSS+HT组和AOM/DSS+HT+APO组NOX活性有不同程度的下降(P<0.05或P<0.01),与AOM/DSS+HT组相比,AOM/DSS+HT+APO组NOX活性更低(P<0.01)。9.结肠组织P38MAPK、p-P38MAPK表达水平:与对照组相比,AOM/DSS组P38MAPK、p-P38MAPK阳性表达细胞明显增多(P<0.01),与AOM/DSS组比较,AOM/DSS+HT组和AOM/DSS+HT+APO组阳性细胞均减少(P<0.01),而AOM/DSS+HT+APO组与AOM/DSS+HT组比较,阳性细胞更少(P<0.01)。结论:APO增强HT对AOM/DSS模型小鼠的治疗效果,其机制可能与抗氧化应激作用有关,P38MAPK通路在其中发挥重要作用。